竞争抑制的双倒数方程为:

1 / V₀= 1 / V_马克斯+ K_米•α/ V_马克斯•1/[S]，其中α = 1 + I/ K_我

根据这个方程，一个双倒数图应该给出一条截距为1/ V的直线_马克斯和斜率K_米•α / v_马克斯．因此，不同抑制剂浓度的Lineweaver-Burk图应该给出不同的斜率(因为α随着抑制剂浓度的增加而增加)，但y轴截距相同。这意味着，这个V_马克斯在不同浓度的竞争抑制剂是不变的;然而，表观K_米K_(应用)(K_(应用)= K_米•α),不同。如果双倒数曲线是1/V₀与1/[S]相比，不同浓度的缓蚀剂产生的斜率直线不同，但y轴截距相同，缓蚀剂具有竞争力(图1)[1]。

图1:图一;线织-伯克图显示竞争抑制。图b;显示每个线性回归曲线的斜率与抑制剂浓度的关系。

计算K_我K_米V_马克斯

如果抑制剂具有竞争性，只需计算1个抑制剂常数。为了计算抑制剂常数，必须进行几种不同浓度的抑制剂试验。每个结果数据集都应该绘制，斜率和y截距可以通过线性回归确定。从这些匹配中，V_马克斯可以计算为y轴截距的倒数。如果没有一个动力学参数被确定，这种线性拟合不能提供足够的信息来确定K_我和K_米．为了确定这些参数，有必要绘制不同测定方法对抑制剂浓度的“斜率”图。因此，根据以下方程:

坡_competetive= K_米•α/ V_马克斯= K_米/ V_马克斯+ K_米/ V_马克斯•1 / K_我•【我】

因此，这张图也会得到一条截距为K的直线_米/ V_马克斯，和斜率(K_米/ V_马克斯•1 / k_我．因此,K_我可以用y轴截距除以斜率来计算。因为V_马克斯已经算出来了，K_米可以从这个拟合的y轴截距计算出来，通过将这个截距乘以V_马克斯．

使用竞争性抑制剂时动力学参数的计算步骤

准备动力学数据的Lineweaver-Burk图，并使用线性回归拟合数据(每个抑制剂浓度拟合1次)。在不同的抑制剂浓度下，Lineweaver-Burk图的y轴截距应该相同(或至少接近)。取y轴截距的倒数;这是V_马克斯．在新图中绘制每条直线的斜率作为抑制剂浓度的函数，并使用线性回归拟合该图。计算K_米，将这条直线的y截距乘以V_马克斯．计算K_我除以这条直线的y截距与斜率。

参考文献

1. Lehninger,阿尔伯特·l·;纳尔逊,大卫·l·;迈克尔·考克斯(2008)。生物化学原理(5日ed)。纽约，纽约州:W.H.弗里曼公司。ISBN 978-0-7167-7108-1。

抑制剂

理论概述