凝胶电泳是一种在实验室中用于分离不同大小的DNA片段的方法。然后可以使用“ DNA梯子”参考来估计这些尺寸。
DNA(例如PCR产物)在凝胶块的一端装载在小井中。然后将电流施加到凝胶上(与井相对的正电极)。由于DNA充满负电荷,因此它将通过凝胶向正电极移动。较小的DNA分子在凝胶中移动的速度比较大的DNA分子更快,从而导致尺寸分离。电泳后,将DNA可视化并显示为每个孔下方。只能可视化大量的DNA(数百万份)。凝胶上还加载了包含已知大小DNA片段的混合物的DNA梯子。然后可以通过与DNA梯子进行比较来估计DNA样品的大小(图1)。
图1。与PCR反应不同长度的片段在凝胶上运行。片段将以速度和距离相对于它们的大小移动:较小的DNA分子将更快,更较长的DNA分子向下移动。
通过将PCR产品与负载缓冲液混合,我们可以看到PCR产物在凝胶电泳过程中传播的距离。加载缓冲液也可用于使样品较重,因此当将其移液管上的凝胶上时,样品会沉入凝胶的底部。
有许多用于加载缓冲区的组合物;但是,它通常包含以下内容:
着色试剂,例如,二甲醇,红色红色,溴酚蓝或橙色G。这将为样品增添颜色,并帮助您可视化琼脂糖凝胶上的样品位置。
高粘度试剂,例如,Ficoll,蔗糖或甘油。这将通过增加总体样品粘度来使样品更重。
水稀释上述试剂。