对于7个样管和5个试剂(其中4个在相同浓度下需要)的实验,显示了所需的移液量。下图显示了在不使用主混合剂的情况下所需的移液量。在同一实验中,现在使用的是主混合剂。注意移液管移动数量的下降——想象一下更大的实验以及实现的时间和工作量差异。

在使用和不使用主混合物的实验中,需要移液器移动的总次数的说明。7个空样管和5个装有不同试剂的样管。试剂用不同的颜色表示,从左到右试剂分别是黄色、红色、绿色和蓝色。第五个样品管也含有试剂,用灰色标记。与每种试剂颜色相对应的彩色线,从试剂管到空样管,说明每种试剂是如何添加到每个样管的。黄、红、绿、蓝试剂都以相同的浓度加入。将不同浓度的灰色试剂添加到每个空样管中。每条线可算作一个移液器移动数,在没有母配的情况下,实验所需的移液器移动总数为35。在插图下面是同样的实验设置的另一个插图,但在这种情况下使用的是主混合。另一个样品管包含混合的物质(用蓝色表示),被添加到设置中,从4个试剂管(用黄色、红色、贪婪和蓝色表示)的彩色线现在从试剂管连接到主混合管,从而减少移液量。 Other lines, also illustrating the pipette movements, now goes from the master mix tube and the gray reagent tube to the 7 empty sample tubes. All pipette movements, from the reagents to the master mix and from the master mix to the empty tubes, leads to a considerably lower number of required pipette movements, which is now only 18

图1:2个实验装置,7个样管,5个试剂(其中4个试剂的浓度相同)。所需要的移液管移动次数被显示。该图显示了使用和不使用主混合液时所需的移液量。

当进行大量相似样品的实验时,通常会准备一个主混合来减轻实验室的工作量。如果你的所有样品都有一个相似的试剂混合物,每个样品只有一个不同的试剂,那么可以用所有常见的试剂制备一个主混合物(当然,这只有在所有试剂需要在相同浓度时才有可能)。现在,当设置你的样品时,你可以从主混合液中移液,然后加入你的可变试剂,而不是混合,例如,每个试管中有4种不同的试剂,数量正确。概念如上图所示。

在这种酶动力学的情况下,在特定的底物浓度下,含有NAD的主混合物+可制备乙醇、缓冲液。当加入酶时,反应就开始了,因此酶不包括在主混合物中。在这种情况下,使用主混合并不重要;然而,该技能对许多应用是必不可少的,它在一般的酶动力学分析中非常有用。

底物浓度计算

在实验中,你需要计算出需要向试管中添加多少底物才能得到所需的底物浓度。这可以使用以下公式:

C1·V1= C2·V2

其中C =浓度,V =体积。记住等号两边用相同的单位!

例子:我们有1 M的底物储备溶液,我们需要200 mM的最终浓度,体积为500 μl;为了达到预期的浓度,我们需要添加多少原液?

如果原液浓度为C1C2最终的浓度和V2将是最后一卷。这使得V1未知的元素。我们现在可以分离V1,插入已知值,计算体积:

隔离:V1= (C2·V2) / C1

插入并计算:V1= (0.2 M·0.0005l) / 1 M = 0.0001 L = 100 μl

理论概述

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