对于7个样管和5个试剂(其中4个在相同浓度下需要)的实验,显示了所需的移液量。下图显示了在不使用主混合剂的情况下所需的移液量。在同一实验中,现在使用的是主混合剂。注意移液管移动数量的下降——想象一下更大的实验以及实现的时间和工作量差异。

图1:2个实验装置,7个样管,5个试剂(其中4个试剂的浓度相同)。所需要的移液管移动次数被显示。该图显示了使用和不使用主混合液时所需的移液量。
当进行大量相似样品的实验时,通常会准备一个主混合来减轻实验室的工作量。如果你的所有样品都有一个相似的试剂混合物,每个样品只有一个不同的试剂,那么可以用所有常见的试剂制备一个主混合物(当然,这只有在所有试剂需要在相同浓度时才有可能)。现在,当设置你的样品时,你可以从主混合液中移液,然后加入你的可变试剂,而不是混合,例如,每个试管中有4种不同的试剂,数量正确。概念如上图所示。
在这种酶动力学的情况下,在特定的底物浓度下,含有NAD的主混合物+可制备乙醇、缓冲液。当加入酶时,反应就开始了,因此酶不包括在主混合物中。在这种情况下,使用主混合并不重要;然而,该技能对许多应用是必不可少的,它在一般的酶动力学分析中非常有用。
在实验中,你需要计算出需要向试管中添加多少底物才能得到所需的底物浓度。这可以使用以下公式:
C1·V1= C2·V2
其中C =浓度,V =体积。记住等号两边用相同的单位!
例子:我们有1 M的底物储备溶液,我们需要200 mM的最终浓度,体积为500 μl;为了达到预期的浓度,我们需要添加多少原液?
如果原液浓度为C1C2最终的浓度和V2将是最后一卷。这使得V1未知的元素。我们现在可以分离V1,插入已知值,计算体积:
隔离:V1= (C2·V2) / C1
插入并计算:V1= (0.2 M·0.0005l) / 1 M = 0.0001 L = 100 μl