光谱仪是一种能提供关于辐射能量强度信息的仪器。一个分光光度计是一种仪器，它确定内部光源发出的光强度与通过给定溶液的光强度之间的比率。这个比值可以用来测定样品中溶解分子的浓度。
在样品被测量之前，分光光度计被设定在某一波长进行测量。所检测的波长可调到测量特定化合物的最佳值。
在测量时，分光光度计返回数据作为吸光度值(A)0/我t),我0入射光的强度(入射到样品上的光)和It是通过溶液并进入光伏探测器的光的强度。
吸光度与浓度呈线性关系，用比尔-朗伯定律描述:
一个=εcl
在哪里c是溶液的浓度，l路径长度，也就是光通过溶液时经过的距离(通常是比色皿的宽度)，而ε是消光系数，这是一种化合物特有的。
图1:分光光度计的组成部分:光源发出的光通过狭缝，只允许一种特定的波长通过。这种光部分通过放在比色皿中的样品，探测器测量比色皿另一边的强度。
在一个例子中，我们将测量NADH的浓度。NADH的最大吸收波长为340 nm;因此，分光光度计设置在这个波长进行测量。NADH的消光系数，ε = 6220 M－1厘米－1．路径长度是试管的宽度，也就是1厘米。
分光光度计使用者必须考虑比尔-朗伯定律的某些局限性。其中一些与技术问题有关;然而，法律确实有一个真正的限制;因为它只适用于稀溶液。当吸收物质的浓度增加时，分子间物理化学相互作用的频率也会增加。因此，在给定的浓度下，这些分子将开始影响邻近分子的电荷分布。当这种情况发生时，吸光度与浓度之间的关系就不再是线性的了。根据经验，在进行测量时，应该保持吸收值低于1。
吸光度与透光率(通过样品而未被吸收的光)。当吸光度= 1时，10%的光通过样品，在2时，1%的光通过样品，以此类推，呈对数趋势。
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