非竞争性抑制剂与酶-底物复合物相互作用，但不能单独与酶相互作用。对于非竞争抑制，双倒数方程为:

1 / V₀=α' / V_马克斯+ K_米/ V_马克斯•1 / [S]

其中α ' = 1+[I]/K '_我

这个方程表明，不同浓度的非竞争抑制剂的酶动力学数据的双倒数图应该给出一条直线，其y轴截距不同，但斜率相同(图1)。在非竞争抑制剂的酶动力学测定中，表观K_米和V_马克斯会随着抑制剂浓度的增加而改变。

图1:a)显示非竞争抑制的Lineweaver-Burk图。B)每个线性回归与抑制剂浓度的y轴截距。

计算K份子,K_米和V_马克斯

当使用非竞争性抑制剂时，无法从初始Lineweaver-Burk图中计算出参数。为了计算不同的参数，必须绘制出这些图的“y截距”与抑制剂浓度的关系:

y轴截距_uncompettive=α' / V_马克斯= 1 / V_马克斯+ 1 / V_马克斯•1 / K_我•【我】

因此，这张图的结果应该是一条截距为1/max，斜率为1/ (V)的直线_马克斯•K_我)．K_我因此，可以用这条直线的斜率除以截距来计算。V_马克斯也可以通过取y轴截距的倒数，计算出这个拟合。因为最初的Lineweaver-Burk曲线有相同的斜率K_米/ V_马克斯K_米可以通过将这些斜率乘以V来计算_马克斯由抑制剂浓度的y轴截距图得到。

使用非竞争性抑制剂时动力学参数的计算步骤

• 准备动力学数据的Lineweaver-Burk图，并使用线性回归拟合数据(每个抑制剂浓度拟合1次)。

• 画出每一个拟合的y轴截距作为抑制剂浓度的函数。

• 计算V_马克斯取y轴截距的倒数。

• 计算K_我y轴截距除以斜率。

• 计算K_米，返回到第一个Lineweaver-Burk图，取其中1个图的斜率(所有图的斜率应该相同或接近)，并将其与V相乘_马克斯．

参考文献

1. Lehninger,阿尔伯特·l·;纳尔逊,大卫·l·;迈克尔·考克斯(2008)。生物化学原理(5版)。纽约，纽约州:W.H.弗里曼公司。ISBN 978-0-7167-7108-1。

抑制剂

理论概述