Figure 1 :Example de chromatogramme

Le chromatogramme (voir figure 1) est la représentation de l'intensité du signal acquis par le détecteur en fonction du temps. Avant que l'analyte n'atteigne le détecteur, nous obtenons un certain signal qui est juste du bruit et qui est appelé ligne de base. Lorsque l'analyte atteint le détecteur, ce signal augmente jusqu'à un maximum et diminue ensuite jusqu'à ce que tout l'analyte ait été détecté. Ce maximum correspond à la hauteur du pic. Le temps écoulé entre l'injection et le maximum du pic est appelé temps de rétention (t_R)

Le pic

Outre le temps de rétention et la hauteur du pic, une autre partie du pic est constituée par sa largeur, qui est mesurée comme indiqué sur la figure. Il est parfois intéressant de mesurer la moitié du pic (hauteur/2) et la largeur du pic à ce point précis (w_1/2)。这些数字是跑龙套倒计算nomb勒”re de plateaux" (N), une valeur qui donne une idée de l'efficacité d'une colonne. Plus le nombre est élevé, plus la colonne est efficace. C'est-à-dire des colonnes qui conduisent à des pics plus étroits et plus nets.

Lorsque deux pics apparaissent dans le chromatogramme, ces paramètres permettent de calculer la résolution (R), qui donne une idée de la qualité de la séparation des deux analytes. Elle doit normalement être supérieure à 1,5 pour une bonne quantification.

Il y a plusieurs cas où la séparation n'est pas atteinte avec succès et le résultat est un pic fusionné au lieu de plusieurs pics distincts correspondant à chaque composé. Comme nous l'avons vu précédemment, la séparation est définie par l'interaction de l'analyte avec la phase mobile et la phase stationnaire. Lorsque la phase mobile et la phase stationnaire ont la même polarité, aucune séparation ne peut être réalisée. Il en résultera un chromatogramme présentant un pic fusionné.

La concentration

Si vous comptez à partir de la ligne de base, vous pouvez voir que la courbe contient une zone définie en dessous d'elle. La surface du pic est utilisée pour réaliser la calibration. Cette surface est en effet proportionnelle à la concentration de l'analyte. Plus la concentration est élevée, plus le pic est important et, par conséquent, plus la surface du pic est élevée.

Une fois que vous avez tracé les points en utilisant les aires de pic des concentrations connues, vous pouvez effectuer une analyse de régression linéaire (y = mx + y₀) pour trouver l'équation qui relie l'aire de pic et la concentration de l'analyte. L'aire du pic est représentée sur l'axe des y et la concentration de l'analyte est représentée sur l'axe des x. y₀est le point d'intersection de la ligne avec l'axe des y, qui est constant. Lorsque vous appliquez une analyse de régression linéaire, vous serez en mesure de déterminer la pente (m) de la ligne. Ainsi, vous pouvez utiliser la surface du pic qui a été traitée pour votre échantillon inconnu et calculer la concentration de l'analyte, comme comme le montre la figure 1.

Figure 2 :Courbe d'étalonnage montrant la relation entre la surface du pic et la concentration.