tras完整lapreparacióndela muestra para la ngs,el adn debe anclarse a una una una de la placa donde donde seAmplificaráde nuevo y seSecuenciará。esta -praceatambiénse denominacélulade flujoy tiene una una alta densidad de cadenas cortas de adn adheridas a su sucrficie。LasMoléculasde adn son capaces de Unirse unapaptador en lalaCélulade flujo,ya que las las secuencias son Replementarias。
Pasos de lageneracióndeclústeres:
DespuésdeQue lasMoléculasde adn se unan a lacélulade flugo hay dos pasos:
pcr de puente
LaMoréculade adn queestáunidaa lamoléculacorta de adn(代表como unamoléculaazul)sedoblaráy seuniráa la otramolécula(代表como unamoléculaMorada),creando un«puente»(ver figura»1)。insonces,una polimerasa seuniráalaMoléculaMoradayAmplificaráel adn,creando dosmoléculasde adn confementarias entresí。continución,se libera el puente y cada una una de lasmoléculasde adn se une una unamoléculacorta de adn。Este proceso sepite varias veces,lo que da lugar a unclústranen e e e ecuentran los dos adn:lasMoléculasde adn queestánunidas a lamoléculaazul y lamoléculay lamoléculay lamoléculade adn de adn que de adn queestáunida unida alaMoléculaamoléculaMorada。DespuésDelaamplificaciónprpcr de puente hay aproximadamente 4000moléculasde adn en en cadaclúster,pero la mitad de ellas se eellas se leiminan por lavado,dejando solo solo 2000Moléculasde adn por clutster。一个连续性描述了este paso。
巴里多
Aunque en este momento tenemos dos cadenas de ADN complementarias unidas a la superficie de la célula de flujo, solo queremos secuenciar grupos de ADN idénticos (clonales) (por ejemplo, solo el ADN que está unido a la molécula azul).Liminaremos las otrasmoléculasde adn queestánunidasa lamolécula莫拉达;por lo tanto,ahora solo ternremosmoléculasde adn sintetizadas con la mismaorientación。Ahora,En Cadaclúster,Solo encontramos adn queestáunidoalaMoléculaAzul,y sonidénticosporque se han amplificado clonalmente。al Final del paso de lageneracióndeclústeres,cabe esperar que obengamos aproximadamente 200 millones declústeresde adn amplificados clonalmente en unacélulade flujo,¡

figura 1:lageneracióndeclústeresmuestra la pcr de puente y laamplificación。