Spannung

Die ElektrischenBedingungenfür死亡ElektroporationSindFürJeden Mikroernermismus unterschiedlich。fürhefe，wie z。B.酿酒酵母，IST DIE OPTIOMALE ELEKTRISCHE BEDINGUNG40μLZELLEN，1,5 kVfüretwa 5 ms。

Zellen

Elektrokompetente Zellen Werden Verwendet，Um Die Effizienz der ElektroporationZuerhöhen。Hefezellen Werden Durch Waschen Elektrokpetent Gemacht，Wobei EineNic​​htionischeLösungLösungVerwendetWird，Um Alle Salze Zu Entfernen。Dieses Verfahren Stellt Sicher，Dass Die Ladung Nicht Durch Durd Das Med Geleitet Wird。DIE OPTIONELE ELEKTROPORATIONFürHefeWird Erreicht，Wenn Hefe在Der MittlerenOderspäten对数阶段Verwendet Wird中。Die Goolegarithmische阶段Der Hefe Kann在Drei Teile Unterteilt Werden中：

• Frühelog-phase：der zeitraum，在dem die die zelldichten etwa 10⁷Zellen/ml betragen。
• Mittlere Log-phase：Die Kulturen Weisen Dichten Zwischen 1 UND 5×10⁷Zellen/ML AUF。
• Spätlog-phase：Tritt Auf，Wenn Die Zelldichten Zwischen 5×10⁷和2×10⁸Zellen/ml Liegen。

在der Googarithmischen相中，iSt iSt die wachstumsrate schnell，und die zellteilungsrateübersteigtdie zelltodrate。Die Zellen Sind Sind Stoffwechselaktiv undverfügerübereine ausreichende GenoMreplikation，Um Eine Effiziente DNA RepraryDurchzuführen。DaherKönnenZellen在Dieser阶段Eine Harte Behandlung Wie Elektroporation Vertragen中。

脱氧核糖核酸

Diehäufigkeitder转换wird durcherhöhungdna-konzentration im elektroporationspuffererhöht。Allerdings Kann Eine Zu Hohe dna-konzentration die effizienz der转换verringern。Die Genaue DNA-Konzentration Mussfürjedes实验BESTIMMT WERDEN。

Elektroporationsmedien

Um EineLichtbogenbildungwährendder lektroporation Zu Vermeiden，Ist ​​es wichtig，Die Elektrokompetente Zelle Zelle Zelle Zelle Zelle Zu Zu Waschen，Um Das wachstumsmedium aus aus der Zelle Zelle Zelle Zu Zu Entfernen。Das Waschen Kann Mit Wasser oder einer nichtionischenLösungwie葡萄糖，甘油，糖，索糖糖，山梨糖醇oder oder poly -engynylenglycol erfolgen。das vorhandensensin von ionischem材料kannwährendder elektroporation zu lichtbogenbildungführen。

Vorzugsweise Wird Sorbitol Verwendet，Weil es als nicht durchdringendes kryoprotektivum wirkt，das dieschädigungder zellmembran beim auim auftauen erheblich erheblich reduziert。Schädena der membran verringern die转换Sefeffizienz Erheblich。

Während des Elektroporationsverfahrens steigt die Temperatur an, und die Zellen erleiden Membranverletzungen, die durch schnellen Wasserein- und -ausfluss aufgrund eines großen extrazellulären und intrazellulären osmotischen Ungleichgewichts verursacht werden.Diese ArtVonSchädigungKann Mit Einem Osmotischen稳定器Wie Sorbitol Verhindert Werden。Sorbitol Wirkt还AlsKälteschutzmittel和Osmoregulator。