L'antigène et l'anticorps utilisés dans la méthode ELISA sont liés à une phase solide. Les tubes et les microplaques en polystyrène, polyvinyle et polypropylène rigides sont utilisés comme phase solide.
Les protéines et autres biomolécules se fixent à la surface par différents mécanismes. Le plus courant est l'adsorption passive. L'adsorption passive consiste principalement en une interaction hydrophobe ou une interaction hydrophobe/ionique entre les biomolécules et la surface.
La forme du puits n'a pas d'incidence sur l'immobilisation des biomolécules mais peut affecter la technique du test ELISA.
L 'absorbance du substrat colorimetrique序e en faisant passer un laser à travers la base de chaque puits. Une plaque à fond plat avec une base claire est donc essentielle. La détection par fluorescence et chimioluminescence nécessite une plaque opaque noire ou blanche.