La conjugaison呢一enzymeà unanticorpsimplique la formation de liaisons stables et covalentes. Voici quelques exemples d'enzymes : la peroxydase de raifort (PR), l'uréase et la phosphatase alcaline (PA). Les anticorps sontmonoclonauxoupolyclonaux.

Dans un test ELISA, l'anticorps conjugué à une enzyme peut être un anticorps primaire ou secondaire, selon le type de test ELISA effectué. Dans les deux cas, l'enzyme amplifie le signal : plus il y a de conjugués enzymatiques liés dans le puits, plus les produits apparaissent rapidement ; moins il y a de conjugués enzymatiques liés dans le puits, plus les produits se forment lentement. Dans le cas des produits chromogènes, lorsque l'intensité de la couleur désirée est atteinte, l'absorbance du produit est mesurée directement. Dans certains cas, unesolution d'arrêtest utilisée pour marquer la fin du test.