酶与抗体的结合涉及形成稳定的共价键。酶的一些例子是：辣根过氧化物酶（HRP），尿素酶和碱性磷酸酶（AP）。抗体是单克隆或多克隆。

在ELISA中，取决于执行的ELISA类型，酶共轭抗体可以是原代或二抗体。无论哪种情况，酶都会放大信号 - 结合在井中的酶相结合越多，产物出现的速度就越快，酶结合物的结合较小，伴随着孔中的酶，形成产物的速度慢。在发色产物的情况下，当达到所需的颜色强度时，可以直接测量产物吸光度。在某些情况下，使用停止解决方案在测定中创建固定端点。