Inoclum

For at kunne begynde en fermentering, så er du nødt til at have en prækultur med et bestemt antal raske celler som inokulum.

For at kunne beregne, hvor meget inokulum, der skal tilføjes til fermentoren, så kan man bruge den nedenstående formel: V₁er volumen, der tages fra inokulum, C₁er koncentrationen af inokulum, V₂er slutvolumen i fermentoren, og C₂er den ønskede koncentration i fermentoren.

Kulturen, der bruges til at inokulering (inokulum) til fermentering, skal imødekomme de følgende krav:

• Raske og i en aktiv tilstand for at minimere lag-fase-tide

• Fri for kontaminering

• Passende morfologisk form

• Tilgængelig i et tilstrækkeligt volumen

• Bevarer sine produktdannende evner

Før kulturen kan bruges som inokulum til en større fermentering, så skal den igennem flere forberedelsestrin:

• Inokulumbevarelse

• Inokulum opbygning/aktivation: 1-2 build-up/ activation: 1-2 rystekolbekulturer

• Præfermentor: 1-3 prefermentorkulturer

• Produktionsfermentor

Kulturer, der har imødekommet alle kravene til et godt inokulum, er nødt til at blive overført til ryseflasker til aktivering af kulturen. Før den kan bruges i en produktionsfermentor, så skal det aktiverede inokulum gradvist opskaleres i præfermentorer. Efter alle trinnene er udført uden kontaminering, så er inokulumet klart til at blive brugt i et produktionsfermentor

Undgå kontamination

En af de værste ting, der kan ske i løbet af fermenteringsforsøg, er at opdage kontaminanter. Kontaminanter er uønskede mikroorganismer, der konkurrerer med den oprindelige stamme om næringsstoffer og afbryder eksperimentet. Kontaminanter kan blive detekteret mikroskopisk eller ud fra et datasæt. En kontaminant vil vokse hurtigt og dermed give anledning til et højt niveau af CO₂- og en stor biomasse-koncentration i forhold til produktet. Det er ekstremt vigtigt at undgå kontamination; af denne årsag skal bioreaktoren være steriliseret før begyndelsen af fermenteringen.

Bioreaktorerkan blive steriliseret med eller uden et medie. Bioreaktorer bliver normalt steriliseret ved at opvarme spolen ved brug af damp i beholderen. Til sterilisering er damptrykket inde i beholderen lig 15 psi i 20 minutter. Efter fuldendt sterilisering, så er det vigtigt at bevare et positivt tryk inde i beholderen; ellers kan et vakuum udvikle sig, hvorved ikke-sterilt luft kan blive trukket ind i beholderen.