La fluorescencia se Genera cuando los Electrons del flurorolocromo que han sido llevados a un estado deEnergía上级descienden de nuevo al estado基本基本（Figura 1）。Los Electrons Son Llevados al Estado deInvicitaciónS₂por luz de una longitud de ondaespecífica。la fluorescencia se emite cuando los electrons pierden el resto deenergíaal descender del estado s₁Al Estado基本。La MenorEnergíadela luz emitida supone que esta luz tiene una una longitud de onda市长。

figura 1：Laabsorcióndeluz de una longitud de onda deconinada propoca laimpitacióndelos electrons de un flurorolocromo al estado s s₂。Los Electrons Pierden Parte de laEnergía，Por Ejemplo，Por Causa del Calor，y Descienden a un estado deenergía劣等，que aunasísigue sigue siendo un esiendo unstado deexcitación，denominado s₁。Cuando Los Electrons descienden de nuevo a su estado基本，Se emite荧光素。La MenorEnergíadela luz emitida supone que esta luz tiene una una longitud de onda市长。

Cuando Utileizamos Distintos荧光群体EN LA MISMA MUESTRA DURANTE LAMICROSCOPíADefluorescencia，Esgemente Que Que que los eSpectrosdeemisióndelos de los do los do solapen de solapen de Manera de Manera显着。si lo hacen，puede que que sea不可能的区别lasseñalesde las dos dosmoléculasuna de otra de otra durante ladetección。Esto se conoce como«bleedthrough»。