克隆技术是一种快速有效的方法clonage.该技术基于modifiées des重组酶du bactériophage lambda的应用。病毒insère与génome在l'ADN和l'hôte中利用酶。Le système de clonage Gateway les use pour réaliser une aison spécifique de site à haute efficacité。deuxième caractéristique这个système的用途是侦察克隆酶的站点appelés网站丙氨酸利用différents类型为了说明.
请看aperçu de la réaction网关。
Les réactions BP et LR
在différentes结构中,réactions BP和façon不包含différents段,déplacés中包含à。当然réaction BP,网址为recombinés。réaction échange l'ADN entre les brins, créant网站attL和网站attR。当然在réaction LR,网站也可以recombinés和manière类似,这是网站也可以的。我的网址是limité,但不是annotés,而是numéros。这意味着存在一个limité的组合。查克位点在群体中重组:例如,位点attL1在群体中重组位点attR1,在群体中重组位点attB1和attP1。场地的朝向是également spécifique,而gène的建筑是prévisible。网的建设souhaitée peut être réalisée en sélectionnant les extrémités appropriées, les réactions et多个向量。
Les différents类型的矢量
可回收材料方便放置à la création de réseaux de vectequi peuvent être utilisés pour combined efficement différentes合成电路génétique.
Les向量d 'expression(AmpR):克隆表达是最终产物réaction。这是完整的质粒,prêt转化。
Les向量donneur(ccdB,菅直人R): le vecteur donneur fournit le squelette pour la création de克隆d'entrée。网址是généralement désignés,名称是commençant,网址是pDONR。质粒预示着在gène ccdB上的位置,在gène上是résistance à卡那霉素。
Les向量在开始(菅直人R): les vecteurs d'entrée sont créés à partir du d' neur et d' an séquence d'ADN flanquée网站和通讯员。Ces séquences d'intérêt sont généralement产品par聚合酶链反应,每个大陆都有'entrée大陆的站点,然后还有séquence d'intérêt,因为它们是卡那辛gène的站点。向量'entrée是idéalement adaptés à和réseau pièces的线路。
这就是目的地(ccdB,AmpR):目的向量是克隆表达的四个小方块。目标向量为généralement désignés,命名为commençant par pDEST。质粒大陆gène ccdB entouré的位点在左邻右右,在右邻résistance à的位点gène。目的地大陆的向量également réplication的起源是hôtes spécifiques和supplémentaires的主题。
洛杉矶的选择
sélection的向量d'intérêt的向量d différentes étapes的向量d procédure的克隆网关非常重要。sélection, système网关是两个抗性辅助antibiotiquesle基因等ccdB pour la sélection阳性。résistance抗生素精品库可以使用细胞transformées développer根据细胞的抗生素精品库的环境不同transformées。
克里兹兹,如果你想了解另外的résistance à氨苄西林.
Le基因ccdB代码une bactériotoxine qui empêche la réplication de l'ADN。对我们来说,网关(pDEST et pDONR)预示着gène和bactéries重要的是gèneccd一个supplémentaire se développeront lorsqerseron transformées的质粒。