La coloration de Gram est une procédure délicate qui nécessite de faire particulièrement attention aux moindres détails. Une préparation de frottis et des techniques de coloration inadéquates produisent souvent des résultats erronés.
La préparation du frottis
Le frottis bactérien : si le frottis est appliqué en couche trop épaisse, les bactéries à Gram négatif apparaissent plus foncées et pourraient être confondues avec les bactéries à Gram positif.
试着始终贴花一个单独微微前倾的德l’organisme que vous voulez étudier.La fixation : si les bactéries sont trop chauffées pendant la fixation, la paroi cellulaire sera détruite et les bactéries ne seront plus capables de retenir le cristal violet.
Toutes les bactéries apparaîtront par conséquent comme étant des bactéries à Gram négatif.Le frottis d’une ancienne culture : si le frottis d’une culture est trop vieux, la paroi cellulaire bactérienne pourrait déjà avoir été détruite, ce qui les rendrait incapables de retenir la coloration au cristal violet. Toutes les bactéries apparaîtraient par conséquent comme étant des bactéries à Gram négatif.
La décoloration
La décoloration produit souvent des résultats erronés lors de la coloration de Gram.
- La sous-décoloration : si l’alcool (décolorant) est éliminé par lavage avant d’avoir eu un effet sur la paroi cellulaire, les molécules de cristal violet ne s’échappent pas de la paroi cellulaire à Gram négatif. Par conséquent, toutes les bactéries apparaissent comme étant à Gram positif (violet) après une contre-coloration à la safranine.
- La sur-décoloration : laisser de l’alcool (décolorant) sur la lamelle trop longtemps perturbe la paroi cellulaire des bactéries à Gram positif et à Gram négatif.
Les bactéries à Gram positif ne peuvent pas retenir le cristal violet, et par conséquent, toutes les bactéries apparaissent comme étant à Gram négatif (roses) après une contre-coloration avec la safranine.
Figure 1 :Exemples de sous-décoloration et de sur-décoloration.