La chromatographie en phase liquide à haute performance (CLHP) est un type de chromatographie en phase liquide. La CLHP est une technique très puissante qui peut être utilisée pour identifier, quantifier ou purifier les composants d'un mélange. La CLHP est différente de la chromatographie en phase liquide traditionnelle car elle utilise une pression opérationnelle beaucoup plus élevée (50-350 bars), alors que la chromatographie en phase liquide ordinaire utilise généralement la force de la gravité pour faire passer la phase mobile à travers la phase stationnaire.
Les principes de la CLHP
Figure 1 :Les composants d'un appareil de CLHP
Comme on peut le voir sur la figure 1, cette méthode utilise une colonne remplie de petites billes qui forment laphase stationnaireet un solvant, appeléphase mobile。Ce solvant se deplace恩典列里面拉pression générée par la pompe.
Lorsqu'un mélange d'analytes (A, B et C) traverse la colonne, ils vont interagir différemment avec la phase stationnaire en fonction de leur propriétés. Les analytes qui interagissent le moins avec la phase stationnaire se déplaceront le plus rapidement (A). En revanche, les analytes qui interagissent le plus avec la phase stationnaire resteront plus longtemps dans la colonne (C) et atteindront le détecteur en dernier.
En chromatographie, les composés qui se ressemblent s'attirent mutuellement. Les composés polaires seront le plus attirés par d'autres composés polaires et les composés non polaires seront le plus attirés par d'autres composés non polaires.
Les deux techniques différentes : la CLHP en phase normale et en phase inverse.
En fonction de la polarité de la phase mobile et de la phase stationnaire, la CLHP peut être classée soit en "phase normale" ou soit en "phase inverse". Dans la "CLHP en phase normale", la phase stationnaire est polaire et la phase mobile est non polaire. Lorsque la polarité est inversée, la technique est alors appelée "CLHP en phase inverse" où la phase stationnaire est non polaire et la phase mobile est polaire.
Les applications de la CLHP
La CLHP est un outil largement utilisé pour l'analyse de toutes sortes d'échantillons. Cette technique est si puissante car, dans les conditions appropriées, des mélanges complexes de plusieurs composés peuvent être séparés. Cette technique peut donc être très utile dans l'industrie alimentaire, dans les échantillons médico-légaux et aussi en pharmacie pour séparer et identifier les composés actifs et les excipients présents dans les médicaments.