当准备荧光显微镜的细胞时，存在不同的步骤：

• 细胞固定：目的是为细胞的“冷冻时间”并保持其蜂窝结构以便在显微镜下可视化。但是，在执行Live-Cell成像时，不需要此步骤。固定可以通过使用两种化学品进行：

  • 醛：它们交联蛋白质以保持其结构。最常用的是甲醛，多聚甲醛或福尔马林。使用醛以固定细胞通常需要淬火步骤，以减少与胺和蛋白质反应时产生的一些副产物产生的自发荧光。

  • 醇：它们沉淀蛋白质以保持其结构。最常见的是甲醇。

• 渗透性：此步骤的目标是提供访问抗体和/或细胞内的化学探针，如果使用用醛固定。由于细胞膜的性质，洗涤剂是透露细胞的完美试剂，Triton X-100是最常见的。如果根据使用的固定和感兴趣的分子的细胞位置，则用户应该评估此步骤是否需要评估。

• 阻止：如果使用抗体，则需要该步骤，因为它将抗体与靶抗原以外的位点的非特异性结合降低。阻断剂通常是蛋白质溶液，其在加入抗体之前竞争非特异性结合位点。牛血清白蛋白（BSA），非脂肪干乳，明胶或吐温20（非离子洗涤剂）的溶液是常用的阻塞剂。