熔融曲线分析用于评价在使用染料(如SYBR)时qPCR检测的特异性^®绿色的。

熔化曲线分析包括qPCR运行结束时的一个额外步骤。样品温度逐渐升高，仪器继续测量荧光。随着温度的升高，双链DNA变性，变成单链，染料解离，导致荧光减少。然后将这条曲线的斜率变化绘制成温度的函数，从而得到熔化曲线。你的扩增子的熔化温度由序列的长度和它的碱基组成给出。具体分析应该优化显示一个峰对应于一个融化,特定PCR产品(见图1)。融化曲线分析可以让你看到如果有qPCR引物二聚体,显示的峰左侧主要扩增子峰如图2所示。在主峰后出现一个峰，如图2所示，可以表示非特异性扩增(如该基因的基因组序列含有内含子，或属于同一基因家族的类似基因等)。

图1所示。理想融化曲线

图2。引物-二聚体的熔化曲线和较长DNA片段的污染。

熔炼曲线分析是对该方法的重要验证分析你们的qPCR数据．