Figura 1.Serbatoio di fase mobile composto da più bottiglie di vetro con tappi speciali.

La separazione degli analiti avviene a causa delle differenze di interazioni con la fase stazionaria e mobile. Gli analiti devono anche essere eluiti per raggiungere la fine della colonna, dove saranno rilevati dal rivelatore. Questo è lo scopo della fase mobile: trasportare i composti dal punto di iniezione al rivelatore.

Lafase mobilee costituita da una miscela di水e solvente或ganico o da miscele di più solventi organici. Se è necessario regolare il pH, vengono invece utilizzate soluzioni buffer. Queste sono importanti quando si tratta di analiti sensibili alle variazioni di pH.

I solventi vengono posti nei serbatoi della fase mobile (vedi Figura 1), che sono costituiti da un flacone con un apposito tappo forato. In questi fori viene posizionato un tubo che collega il serbatoio della fase mobile alla colonna. La fase mobile viaggerà attraverso questi tubi (vedi Figura 2), nella colonna e poi fuori al serbatoio di scarico.

Figura 2.Filtro e tubi utilizzati per collegare il serbatoio della fase mobile alla macchina HPLC.

Tecniche:

Esistono due tipi di tecniche basate sulla composizione della fase mobile durante l'esperimento.

• Modalità isocratica: la composizione della fase mobile rimane costante durante il tempo di esecuzione.
• Eluizione gradiente: la composizione della fase mobile cambia nel tempo.