Aprèsla.GénérationD'MAS.,尼苏姆斯PrêtsàCanmencerle Processus deséquençanage。IL存在PlaceireFaçonsd'Eppertyer leSéquençagedenouvelleGénérationen Fonction de la Plateformeutilisée。Dans Ce Laboratoire,Nous Utilisons LeSéquençanage综合征d'Illumina。Cela Imprique Que LesDonnéesdeéquençanageSontObtenuesenSynthétisantChaque Faire De Bases。考生CE Processus。

固定de lapolymérase

UNE FOIS Que Le Cluster D'Adn Clony EstFixé®LaLamede Verre,LesréactifsdeSéquençaceSontEvoyésdedans。Ils entrent d'联合国科拉丝·莱姆德尔德·埃尔特雷L'AdnPolyméraseT4EstInjectéeet se fixe aux actesoléculesd'aadnliéesàlalame deverre。Lapolyméraset4 EstModifiéeplypettrel'Inclation d'Une Seze Base。

LES 4核酸SontMarquéspar联合国荧光素Spécifique。Mengevous Pouvez Le Voir Sur La图1,La胸腺内EstMarquéeVEC联合国荧光团vert.,la cytosine avec联合国荧光团Bleu.,La Guanine Avec联合国荧光团胭脂et l'adénineavec联合国荧光团橘子。CESNucléotidesSontégalementModifiés:ILS POST'DENT UNEECOIFFEàl'eutterémité3'qui ne permet l'ajout que d'un seulnucléotideàlafois。ParAmeréquent,UNE FOIS Qu'unNucléotideAétéAjoutéàl'Extrémité3'del'Amorce,Aucun Autre核酸Ne Patut S'y Fixer。Tous Les AutresNucléotidesStresSontSonuiteÉliminésduSystème。

图1:Séquençanageparsynthèse。Une fois que lapolymérases'estfixéeàl'amorce,des核桃marquéspar联合国荧光团spécifiquesontajoutésàl'eutterémité3'del'Amorce。lesnucléotidessontmodifiéspar unecoiffeàl'eutterémité3'qui ne permet l'ajout que d'联合国Seul核酸核桃àlafois。Le Signal荧光灯Émis帕尔乐荧光团Estdétecté,et LaCoiffeàl'Extrémité3'Estdécoupée,CE Qui丙普·欧洲统一仪式Suivent deanquençanagesuiventde Suvent de univent de univent de univent debNucléotidesmarquéspar联合国荧光团

点亮

Comme Tous LesNucléotidesSontMarquéssityuellementAvec联合国荧光团Spécifique,Nous Pouvons Identifier LesNucléotidesen Visitant Le信号荧光Qu'ilsémettent。Par Exemple,Dans La图1,Nous Pouvons Observer QuouunNucléotideMarquéAvec联合国荧光团vert.AétéAjoutéàl'eutterémité3'del'Amorce。Uneréactionchimiquedéclenchel'émissionde lalumière垂直quipatêtreenregistréeengenten une照片。Comme Nous Savons Que La胸腺嘧啶EstMarquéeParLefumerophoreVert,Nous PouvonsDéterminerQue La Base Est La胸腺。Quatre照片SontPrisesàlafende chaque cycle et endegistrent chacune des couleurs possibes。Aprèsavoir pris les quatre照片,Lesystèmeles叠加。AINSI,别蓄水部件识别率LA基础DE Chaque Cluster(VOIR图2)。

图2:Une ImageSuperposée,Chaque Point de CouleurReprésente联合国群集D'AdnAmplifiédeFaçonClonale。Les Codes de Couleur Pour Les Quatre核查Différents:胸腺嘧啶,胞嘧啶,鸟嘌呤EtAdénine。

Clivageetélimination.

AprèsLa照片,LaCoiffeàl'eutterémité3'dunucléotideestzécoupéeafin que le cycle deséquençanagesuivant puisse普通人。La Coiffe3'ClivéeStEnSuiteRetiréeduSystème。Cela Marque La Fin D'Un Cycle deSéquençage,et le Nouveau Cyct Patue Commencer en Envoyant deNouvellesSériesdeNucléotidesetenRépétantLESÉtapes。

AprèsleSéquençanage,Les Images Sont Instruites Dans Un Ordintur et LesDonnéesdeéquençagePeuventêtreanalyséesAVEC UN LogicielSpécifique。

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