una pcr esunmétodoutilizado para para para prepar miles de millones de copias de secuenciasespecíficaceadn。

POR LO，PARA ANALIZAR LA SECUENCIA O LA LONGITUD DEL ADN，SE RESSIEREunNúmero市长de copias de la secuencia de secuencia descuecíficficeficaceficficaque e e e e e e ecuentra en una una una una una una una muestra normal。Además，LaReaccióndeuna pcr es Altamenteespecíficefica，lo que que que que solo producias de una secuencia secuencia secuencia secuencia a partir del del adn Molde（Muestra）。Los Partidores Garantizan Esta especificidad，Puesto queestándiseñadospara ser ser recementarios enespecíficficace cada lado de laregióndeadn deinserés（regiónobjetivo）。estascaracterísticashacen de la pcr unatécnicaMuyoutilen processimientos como lagenotipificacióndeMarcadores，Antes de lasecuenciación，o en diversas pruebas de adn。

Figura 1.Una pcr consta de tres pasos：1。Desnaturalización，2。Alineamiento y 3.Extensión。Los Pasos se Repiten Muchas Veces（Menudo 30个veces），Lo Que da Lugar A Miles de Millones de Millones de copias de adn de aDn deecepecíficficas。

pasos de una pcr

PARA PORAR MILS DE MILLONES de Copias de Adn，Se Realizan Muchos ciclos repetidos desíntesisde adn en en un tubo de pcr。CADA CICLO CONSA DE TRES PASOS DISTINTOS DECHIDOS pOR la tempatura（figura 1）。Todos Los Ciclos Se Realizan sinIntervenciónenunaMáquinade pcr，Que Puede Cambiar la pemperaturaautomáticamentedeSpuésdecada paso。

1. Desnaturalización（95ºC）：los eSta leterapatura，dehidrógenoque mantienen unidas las dos dos cadenas de adn se rompen，lo que que proppoca que las cadenas cadenas de adn se separen。El adn monocatenario ya se puede copiar。
2. Alineamiento（54ºC）：一个54°C, una部分cortas de与llamadas partidores se unen a puntos complementarios del ADN molde. Los partidores definen la secuencia objetivo, que es la región específica del ADN que se copiará. La temperatura de alineamiento se calcula a partir de la composición de los partidores (el número de nucleótidos y el número de guanina y citosina). Normalmente, hay que calcular la temperatura de alineamiento óptima para cada partidor. En este caso, consideramos 54 °C como temperatura de alineamiento para todos los partidores.
3. Extensión (72 ºC):A72ºC，Una Enzima Llamada adn polimerasa se Encarga de copiar el adn。重新计算El Extremo 3'de Un零件群岛Una cadena Molde y comienza a Copiar el Adn Molde。

Al Final de Un Ciclo，Algunas分会De las Cadenas de adn iniciales han deplicado sunúmero。Al Final de，Por Ejemplo，30 Ciclos，正常现象的Mentiante PCR，Al Menos Mil Millones（2³⁰）de copias de la secuencia objetivoestaránenel tubo。Para Realizar La PCR，Es NecesarioAñadiradn Polimerasa，nucleótidos，partidores y el Adn que se desea desea desea liturizar como como Molde。

pcr eactivos de pcr

se necesitan varios reactivos para realizar un persimento de pcr;

• Partidores：Los Partidores una una secuenciaespecíficficade adn y marcan el Inicio de laamplificacióndel adn。
• nucleótidos：necesitannucleótidospara para la nueva secuencia de adn。
• Polimerasa:La polimerasa es una enzima que ensamblalosunucleótidossobre la base de la secuencia Molde。
• ADN MOLDE：Se Requiere Un Molde para que sirva de una nuevaamplificacióndela secuencia de adn。

Al Preparar un Perferimento de pcr，Hay Que Tener Mucho Cuidado con lacontaminación。Una pcr es unatécnicaMuyPotente deamplificacióndeadn。Esto significa que si hay una pequeña contaminación (por ejemplo, ADN de otras muestras), este ADN también puede acabar amplificándose, compitiendo con el molde original y arruinando los resultados de tu experimento.Para evitar la contaminación, debes utilizar siempre guantes y trabajar en un entorno muy limpio (cambia las boquillas de las pipetas cuando pipetees de un recipiente diferente, recógete el pelo, no tosas ni estornudes cerca de la mesa de preparación de la PCR, etc.）。

como se ha descrito的前部，un terperimento de pcr puedesesgarfácilmenteel usculto el under el under el under el under。Por Ello，Debemos Minimizar la Probilidad de error en la pcr，Especialmente cuando se enmarca dentro de un proceso tan delicado como la [secuenciacioun de nueva de nuevagentación（ngs）]正常人，El Paso de la pcr en la ngs solo consta de 10-12 ciclos。Todo error que se produzca en el paso de la PCR se traducirá en un desajuste en la alineación de los datos de la NGS, especialmente aquellos errores que se produzcan en las primeras rondas de la PCR, que aparecerán en múltiples lecturas y sugerirán una variación genéticaIncistente en la Muestra。