体外培养细胞的一个重要因素是控制物理化学条件。的培养基是细胞培养环境中最重要的组成部分，因为它提供了必要的营养，但也因为它提供了其他成分，如碳酸氢钠或红酚，以帮助控制所需的物理化学条件。

pH值

大多数正常的哺乳动物细胞株在pH值7.4下生长良好，不同细胞株之间的变异很小。因此，为了控制细胞培养环境的pH值，一些培养基包括pH指示剂，如酚红，它也能保护细胞不被紫外线降解。

图1:酚红的颜色随pH值的变化而变化。

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生长培养基控制培养液的pH值，并缓冲培养液中的细胞免受pH值变化的影响。通常，这种缓冲是通过添加CO来实现的₂碳酸氢盐缓冲。因为培养基的pH值依赖于溶解的二氧化碳(CO₂)和碳酸氢盐(HCO_3.^-)，大气CO的变化₂可以改变培养基的pH值。因此，有必要使用外生CO₂， 5% CO₂最常用的浓度。

图2:溶解CO的平衡₂和HCO_3.^-需要维持pH值

温度

细胞培养的最佳温度在很大程度上取决于分离细胞的宿主的体温。大多数人类和哺乳动物细胞系保持在36°C至37°C的最佳生长。这也是使用试剂前要对其进行预热的原因之一，以避免细胞内的热冲击。

然而，这些一般情况可能因细胞类型而异。因此，熟悉您正在使用的细胞类型是很重要的，以避免不期望的表型或不成功的培养。