Nicht Alle Gene WerdenStändig在Allen Zellen Exprimiert中。Eine Zelle Muss在mRNA UMSCHRIIBEN,UM DAS KODIERTE蛋白Herzustellen中死亡DNA-Sequenz。daher entspricht das niveau der genexpression dem niveau der mRNA。Die GenExpression Kann Mit Einer逆转跨性 - 聚合酶-Kettenreaktion(RT-PCR)Gemessen Werden。Die Rt-Pcr Besteht Aus Folgenden Schritten:

  • cDNA手套反向跨环蛋白酶中的umwandlung der rna

  • 放大cDNA手套PCR

Abbildung 1:Schritte Zur Herstellung von cdna aus einer mrna-vorlage。Unter Verwendung Eines Oligo(DT) - cDNA UMGESCHRIEBEN,GEFOLGT VON EINER HALDOLYSE dES RNA-STRANGS中的Primers Wird mRNA。

mRNA IST EMPFINDLICHER ALS DNA和KANN NICHT DUCH PCR PCR AMPLIFIZIERT WERDEN。AUS DIESEM GRUND WIRD mRNA中的KomplementäreDNA(cDNA)Umgewandelt。cDNA IST DNA,DIE AUS BOTEN-RNA-MOLEKülenSynthetisiert Wird。Die cDNA-synthe wird durch ein酶namens反向transkriptase katalysiert,das rna als als vorlagefürdna dna-syntheshthese verwendet。反式旋转酶WurdeursprünglichAuseinem逆转录病毒entdeckt和Isaliert。diese viren焓EIN RNA基因;DaherMüssenDie viren eine eine cdna-kopie ihres Genoms Herstellen,Um Mit der Molekularen maschinerie maschinerie der Wirtszelle kompatibel Zu Zu sein。

Die Rt-Pcr-Reaktion Umfasst Die Folgenden Schritte:

  • EIN OLIGO(T) - 碎片Wird Als底漆Verwendet,Um an den 3'-poly(a)-schwanz jeder mrna zu binden。

  • 倒反向transkriptase verwendet die rna als vorlage,um cdna-strängezu synthetisieren。

  • das entandene rna-cdna-hybrid wird durcherhöhender温度aufgetrennt。

  • EIN Genspezifischer底漆BINDET A sEINEKOMPLEMENTäresequenz。

  • DIE DNA-聚合酶Erzeugt denKomplementärenDNA-trang,AusgeHend von der Primer-bindungsstelle。

  • DiesträngeWerdendurcherhöhender温度getrennt和der pcr-zyklus wird wird wirderholt。

Am Ende der Rt-Pcr-Reaktion Liegen Milliarden von Kopien des Interseserenden Gens Vor,Wenn Das Gen Exprimiert Wurde。Die anzahl der dna-kopien kann durch凝胶植物Sichtbar Gemacht Werden。

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