维护que nous avons une celluled'écoulementremplie d'Adn,nous pouvons'séquençage。Il存在Pluseursfaçonsd'effectuer unséquençagedenouvellegénérationen fonction de la plate-plate forme que vous vous utitiesez。l'une d'Elles est leSéquençageparnytthèseDans Lequel LesDonnéesDeSéquençageSsont Obtenues ensynthétisantchaque paire de bases。

CetteSynthèseComporte2étapes。audébutde lasynthèse,il y a a a 2 brinsd'AdnAdnalalèles,une matrice de 3 Primeà5prime et une anmorce de 5 prime -3 Prime。La Matrice的偏见denucléotidesA,g,c,t,puis 6nucléotidesinconnus。L'amorce a la séquence de nucléotides T, C, G, A, puis un groupe O H. Il y a 4 nucléotides flottants qui n'ont pas réagi, T, C, G et A, chacun avec une coiffe réversible O H 3 primeEt Unolorant荧光易变。Dansl'étape1,l'amorce estallongée。lenucléotidet挥舞着avec le groupe o h 3 Prime sur l'Amorce。l'amorce a维护剂une coiffe 3 prime et unemission de荧光独特。dansl'étape2,l'émisiondede fluoresence estdétectée,puis la coiffe 3 prime et le le le le y le y le y l le ylelate荧光荧光clivable clivable sséparésde l'amorce。l'amorce anucléotidest,c,g,a,t,puis un groupe o H.

图1:leséquençageparnytthèse。une fois que lapolymérases'estfixée -l'Amorce,desnucléotidesMarquésmarquéspar un荧光团spécifiquesontajoutés - l'extrémité3'del'amorce。lesnucléotidessontmodifiéspar une coiffe 3'qui ne permet l'ajout que d'un seulnucléotide -la fois。Le Signal de荧光émispar le荧光团estdétectéet la coiffe 3'Estclivée,ce qui permet au Cycle deséquençageususuivantde suivant de commencer。

la固定de lapolymérase

une fois que l'Amas d'Adn clonal s'estfixé -la celluled'écoulement,lesréactifsdeSéquençagesvoysvoyésdansdan la colluled'écoulement,en en en en en en en en en en en en en en nun uncôtéet en ancôtéet en an autent de l'autre autre。L'AdnPolyméraseT4estrictuite et se fixe - laMoléculed'Adn courteliée - la celluled'écoulement(Qui sert d'amorce deséquençage)。

lesnucléotidesmarquéspar un荧光团

Chacun des QuatrenucléotidesestMarquépar Un荧光团spécifique。Paremple,la胸腺素玛奎尔par un荧光团,La cytosine par Un荧光团Bleu,la Guanine par Un荧光团rouge Rouge etl'Adéninepar Un荧光团橙色。cesnucléotidessontégalementodifiés。Leur coiffe 3'ne permettant l'ajout que d'un seulnucléotide - la fois,une fois qu'unnucléotidea fo'unnucléotideAétéAjoutéAjouté -l'extrémité3'del'Amorce,aucun autre autre autrenucléotideneune neutre neutide ne peut s'y fixeer。lesnucléotides库Restants sont noiteéliminésdusystème。

LaDétectionpar荧光团

ÉtantDonnéque tous lesnucléotidessontmarqués个sontulellement par un荧光团spécifique,nous pouvons识别剂lesnucléotidesen observant en observant en observant le leservant le signals le signal de荧光qu'ilsémettent。Paremple,Dans la图1,nous pouir qu'unnucléotidemarquéparun fluororophore vert estajouté -l'extrémité3'del'amorce。uneréactionchimiquedéclenchel'émisignedelaumièreverte quipeutpeuttecaturéeenPRENANT UNE照片。Comme nous savons que la thymineestarquéepar le荧光团,nous pouvons标识符la base comme comme la thymine。Quatre Photos Sont sont the fin de Chaque循环,Chacune des Couleurs的可能性。AprèsAvoirPris les Quatre照片,LeSystèmeLesSuperpose,de Sorte que nous pouvons标识符apparier jupartierl'Identitédebase de base de base de chaque amas。

Le Clivage et l'Elimination

aprèsla奖de la photo,la coiffe 3'dunucléotideestséparéepour pour que le cycle deséquençageusueusivant puisse commencer。La Coiffe3'ClivéeEstseesuiteéliminéedusystème。Cela Marque la Fin d'un CycledeSéquençage等人周期peut peut commencer par le nettoyage de nouvelles denucléotideset larépétitiondesétipes。

En Savoir Plus: -leséquençage简单和lesequençageàFuretémitéAppariée

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