Fosforylering betyder tilføjelsen af en fosfatgruppe. Med hensyn til dette på et substrat-niveau, bliver fosfatgruppen fjernet fra en intermediær reaktant i den metaboliske vej, hvor reaktionens frie energi bruges til at tilføje et tredje fosfat til et tilgængeligt ADP-molekyle, hvilket medfører dannelsen af ATP (se det nedenstående billede). Icellulær respirationhæ雄鹿dette我lø打赌房颤glykolyseogKrebs' cyklus.

Ved fosforylering på et substrat-niveau, bliver fosfatgruppen af en intermediær reaktant overført til et ADP-molekyle til syntese af ATP.