如果你没有在你的USER实验中达到预期的结果，你可以检查一些简单的事情，比如将你的质粒存储在小于50 μ L的aliquots中，或者看看下面的建议。

X)结果

-可能原因:>解决方案

1)无PCR产物

• 产品太长-->分成两个用户反应

• 错误的聚合酶添加-->使用与尿嘧啶兼容的DNA聚合酶

2)改造后无菌落

• 引物设计不当-->仔细检查引物，例如用AMUSER

• 用户酶太老了-->用一批新的酶代替酶。用之前有效的克隆反应来测试酶(可以保存并用作阳性对照)

3)一些殖民地

• PCR产物产量低或质量差-->优化PCR以获得更好的产量

• 细菌不称职-->使用新一批感受细胞或尝试不同类型的细胞

4)菌落中只有模板载体

• dpni或纯化后模板未被正确去除-->更换DpnI批次或增加DpnI孵育时间

• 向量self-ligation-->重新设计引物进行矢量放大