배양 플레이트는 vitronectin으로 코팅되어 PSC 부착과 적절한 성장을 보장해야 합니다. 플레이트를 코팅하려면 먼저 PBS에 vitronectin을 희석하고 배양 표면적, 이 면적에 필요한 용적, 지정된 코팅 농도를 사용하여 working concentration로 준비 합니다. 이 코팅 농도는 세포주에 따라 다르며 보통 0.1-1.0µg/cm2이고, 표준 농도는 0.5µg/cm2입니다. 추가 정보:
작용 농도=코팅 농도 x (배양 표면적/표면적에 필요한 용적)
아래 표를 참고하면 됩니다.
| 배양 용기 | 근사 표면적(cm2) | 희석 기질 용적(mL) |
|---|---|---|
| 6-well 플레이트 | 10cm2/well | 1mL/well |
| 12-well 플레이트 | 4cm2/well | 0.4mL/well |
| 24-well 플레이트 | 2cm2/well | 0.2mL/well |
12-well 플레이트 사용:
작용 농도 = 0.5µg/cm2x(4厘米2/ 0.4 ml) = 5µg/mL
vitronectin stock 농도가 0.5mg/mL인 것을 고려하여 희석 인자는 다음과 같이 계산합니다.
희석 인자 = Stock 농도(0.5mg/mL)/작용 농도
희석인자= 0.5 mg / mL / 100µg / mL = x
따라서 전체 12-well 플레이트를 코팅하려면 PBS 4.752mL에 48µL를 추가하고 각 well에 이 혼합물 0.4mL를 첨가해야 합니다. 냉동/해동 주기를 과도하게 반복하지 않으려면 stock 용액을 분주하여 준비하는 것이 좋습니다.
플레이트를 코팅하고 나서 실온에서 1시간 동안 배양한 후 사용해야 합니다. 그렇지 않으면, 이 플레이트를 2-8°C에서 최대 1주일 간 보관할 수 있습니다. 용액 증발을 막으려면, 플레이트를 적절하게 밀봉하고 최소한 사용 1시간 전에 실온에서 가온해야 합니다.