化学发光是Western blotting中应用最广泛的检测系统。在化学发光检测中，酶联二抗被用来将底物转化为发光的底物。光的发射通过电荷耦合器件(CCD)相机或摄影胶片进行检测。

Western blot结果被认为是半定量的，这意味着它提供了蛋白质水平的相对比较，而不是蛋白质数量的绝对测量。