La méthode d' assembla3a(三种抗生素)允许两个组合bio-briquesl 'aide d一个限制酶的克隆.三个抗性辅助antibiotiquesDifférentes permettent une sélection有效的微生物组合grâce辅助抗生素。集合3A利用préfixe上的限制地点,以及为两个团体的集合者提供后缀。

Une sélection抗生素疗效évite d'avoir recours à la净化苏尔凝胶等一个拉聚合酶链反应des殖民地卡会。在théorie,环境97%的殖民地邪恶的对应à l' assembldre souhaité。

方法

一个集合réussi,两个团体和一个小团体différents gènes résistance和résistance的抗生素精品店(图1中flèches黄线symbolisés)。

图1:汇编3A(来源:iGEM.org)

  • 消化酶不受限制

    • L'échantillon间扭式结构为découpé avec EcoRI (E)和SpeI (S)。

    • L'échantillon de droite est découpé avec XbaI (X) et PstI (P)。

    • 质粒结构为découpé, EcoRI (E)和PstI (P)。在图1的例子中,质粒结构linéarisé为utilisé。我们可以使用质粒含量基因ccdB

  • 限制酶的三种消化酶chauffées倒détruire toutes Les酶de限制

  • 结扎: une quantité équimolaire有三种酶的消化产物combinée和réaction的捆绑产物。résultat souhaité是'extrémité排序的顺序,échantillon排列的顺序,'extrémité排列的顺序,直线的顺序,这是酶的顺序。新échantillon合成ligaturé在EcoRI和PstI的位点上构建一个小的质粒。

  • 结扎在细胞上transformée在菌斑上cultivée在抗生素C上,结扎在菌落上dotées在良好的结构上存活。

Baidu