互补DNA (cDNA)是由信使RNA分子合成的DNA。cDNA合成是由一种叫做逆转录酶的酶催化的，逆转录酶使用RNA作为DNA合成的模板。逆转录酶最初是从逆转录病毒中发现并分离出来的。这些病毒包含一个RNA基因组;因此，病毒需要产生其基因组的cDNA副本，以与宿主细胞的分子机制兼容。
cDNA的合成方法有很多种;在这种情况下，我们将使用传统的方法来合成cDNA。
传统的互补脱氧核糖核酸的合成:
- 一个oligo(T)片段被用作引物，以结合到每个RNA的3 ' poly(a)尾部。
- 逆转录酶以RNA为模板合成cDNA链。
- 得到的RNA- cDNA杂交处理碱或RNase水解RNA。
- 被链的DNA折叠起来，在3 '末端形成一个环。环产生的双链部分作为DNA聚合酶的引物，合成互补的DNA链。
- S1核酸酶将切断环，产生双链DNA。