DNA
DNA er arvematerialet for alle levende organismer, inklusivt mennesker. DNA opbevarer sin information i en genetisk kode opbygget af de fire kemiske baser: A(Adenin), T(thymin), C(Cytosin) og G(Guanin) og det er rækkefølgen(eller sekvensen) af disse fire baser der diktere den kodede information. Informationen bliver brugt som en instruktion til konstruktion og vedligeholdelse af celler i en organisme. Figur 1 illustrere hvordan disse fire baser er organiseret. Det menneskelige genom består af ca. 3.2 billion base par.
DNA stuktur
DNA er opbygget af to strenge, som løber i hver sin retning der er twisted sammen til en dobbelthelix struktur. Strengene er opbygget af nukleotider og deoxyribose sukre. En fosfordiester forbinder deoxyribose sukrene med hinanden og hydrogenbindingerne imellem fosfaterne for strengen til at twiste. De to strenge sidder sammen med svage hydrogenbindinger imellem de komplementære baser. Nuklotiderne er i midten af strukturen, ligesom trinnene på en stige. Adenin binder sig til thymin og cytosin binder med guanin (Figur 2)
Isolering af en DNA prøve
DNA 'et bliver opbevaret我•柯南af高压celle。德tte betyder at DNA kan isoleres fra alle prøver, som indeholder eukaryote celler. Normalt kan man tage en blodprøve, og så isolere DNA fra de hvide blod celler (røde blodceller har ikke nogen kerne). Hvis det ikke er sikkert at udfører en blodprøve eller for farligt (Børn, dyr, retsmediciner), kan man også tage en mindre prøve fra munden (epitelceller) eller fra hårsækken.
德r findes flere typer af DNA her iblandt: genetisk, komplementært, mitokondrielt og ikke kodende. Genetisk DNA er den fulde DNA sekvensen, inklusivt de kodende exons og ikke kodende introns. Alle celler i vores krop vil have den samme genetiske kode, medmindre der er sket en mutation eller fejl i løbet af ens liv. Komplementært DNA bliver dannet af reverse transcription RNA, ofte brugt til qPCR(kvantitativPCR) som kan fortælle noget om udtrykket af et bestemt gen. Fordi komplementært DNA bliver dannet på baggrund af en RNA skabelon indeholder den kun exon delen af genet. DNA fra mitokondrierne kaldes mitokondrielt DNA, og i mennesker kan dette kun arves fra ens mor. Ikkekodende DNA, er dele af sekvensen som ikke koder for noget specifikt protein. Mennesker har en høj procent af ikkekodende DNA; optil 98% af vores genom består af ikke kodende DNA!
DNA isolering
DNA kan isoleres fra de fleste celler, dog skal cellen først sprænges(kaldet lysis). Dette kan ske enten ved hjælp af kemiske stoffer eller fysiske metoder så som mosning eller sonikering. Når cellemembranen så er ødelagt skal membran lipiderne fjernes ved hjælp af opløsningsmidler, proteinerne bliver fjernet med proteaser, og RNA ved hjælp af RNase. Nu kan DNA’et så fikseres medf.eks.ethanol og isoleres fra de restende cellerester. Der er mange metoder som kan bruges til at isolere DNA fra en celle, en af de mere populære metoder er ved hjælp af phenol og chloroform. Dog er det blevet udviklet nemmere og sikrere metoder, ved brugen aff.eks.søjle separering.
