测序是用于“读取”DNA片段中核苷酸的精确顺序的技术。小的脱氧核糖核酸可以测序片段,全基因,甚至基因组。
最广泛使用的DNA测序技术基于Sanger开发的链终端。这种方法非常相似聚合酶链式反应(PCR)但仅涉及一个引物,其在DNA模板的3'末端接近感兴趣区域(图1)。在测序反应期间,将正常核苷酸(DATP,DTTP,DCTP和,DGTP)和“止止” - 核苷酸(DDATP,DDTTP,DDCTP和DDGTP)的混合物添加到DNA模板中。止动核苷酸各自标记为特定颜色。在每个循环中,目标DNA通过DNA聚合酶复制直至加入止核苷酸,这阻止进一步伸长伸长(链终止)。在35次循环之后,产生所有可能长度的大量片段。这些片段在特殊的丙烯酰胺凝胶中运行,其中它们的长度和“底座”被检测到。因为基于凝胶中的尺寸分离片段,所以将标记的核苷酸逐一检测,因此可以重建片段中的精确DNA序列。
测序的目的是例如预测基因的蛋白质序列,以比较序列水平(基因或基因组)的物种,或搜索突变。

图1:Sanger(链终止)DNA测序方法的示意性概述
在伸长次循环期间产生所有可能长度的DNA片段,每个终止于有色止动核苷酸。当根据凝胶上的尺寸分离片段时,检测到的颜色顺序将指示精确的DNA序列。