DIA DNA-SECENZIERUNG IST EINE METHODE ZUR SIDENIFIZIERUNG JEDER EINZELNEN碱基Eines eines dna-trangs。
Sequenzierung der Esteren Generation
Abbildung 1。kettenterminierungsmethode。Die Markierten Dna-MoleküleWerdenIhrerGrößeNachGetrennt。JedesMolekülBesitztein modifiziertes nukleotid（ddntp），韦尔奇斯Mit Einem fluoreszenten farbstoff markiert ist。Jede Base besitzt Eine Unterschiedliche fluoreszente farbe。
Die Sequenzierung der Esten Generation Bezieht Sich Auf Die Kettenterminationsmethode，Die 1977 von Fredrick Sanger和Seinen Mitarbeitern Entwickelt Wurde（Abbildung 1）。DAS DNA-MOLEKülWirdMit Mit Einem modifizierten nukleotid amplifiziert，Jedem Zyklus wird wirn nur eine base baseangehängt。dna wird dann mit variierenderlängeamplifiziert：
Jeder Strang Ist EinBasenpaarLängerAlsdas vorherigeMolekül。DieMoleküleWerdenDann在Einer Kapillare Getrennt中。Jede基础MIT EINEM FLUORESZENTEN FARBSTOFF MARKIERT。Indem Die Unterschiedlichen farbsignale ausgelesen Werden，sind wir in der lage，die base zu Zu dissineifizieren（a，g，t oder c）。
SequenzierungderNächsten代
Die SequenzierungderNächsten生成（下一代阶段，NGS）IST Eine FortgesChrittene Technologie bei der Viele kurze dna-Molekülegleichzeitig sequenziert sequenziert werden。Die Technologie Wird Auch巨大的平行序列Yenzierung bezeichnet。Die Kurzen Dna-MoleküleWerdenDann Zusammengebaut，Indem Ihre sequenz Mit Einer Referenzsecedenz verglichen wird。Durch denZusammenbauKönnenwil die komplette dna-sequenz erhalten，die sehr lang sein kann（所以lang wie unser gesamtes Genom！）。
Es Gibt Viele unterschiedliche arten des Next-deneration-sequins und jede verwendet eine andere sequenzierungsmethode。在未来可逆的farbstoff-termetinationsmethode冯·伊卢米纳·康森特里伦（Von Illumina Konzentrieren）。在dieser中，kürzereSträngefragmentiert und zwei kurze dna-molekülenamens“ apapter” werden and jedes en jedes ende ende der proce ligiert（abbildung 2）diese适配器真菌Als primerbindestelle，um Die dnawährendder pcr zu zu amplifizieren und die die diefließzellezu binden。Bevor Wir Die Daten Analysieren，Entfernen Wir Die适配器，Da Sie Keine Biologische Sequenz Darstellen。
Dna-Moleküle-mit适配器和Primern Werden Zuerst a DiefließzelleAngehehehehehehefettund Mit Hilfe des酶聚合酶聚合酶Amplifiziert是Zur bildung dna dna dna dna-kolonienführt。diese dna-kolonienheißenauchDNA群集。Jedes clusterEnthältgenau die gleiche dna-sequenz;DESHALB WIRD DIE DNA AUCH KLONAL GENANNT。ähnlichZur sequenzierung derersten Estrenten sind Die Nukleotide sionsuell Mit fluoreszenten farbstoffen Markiert。nach der添加Eines nukleotids endet die伸长和wird ein bild bem gemacht。Danach Wird der Blocker Am 3'-Ende Chemisch von der dna Entfernt是DenNächstenZyklusErmöglicht。
Die ParallelSeconsequalsemenzierung Produziert Millionen und Milliarden阅读Pro Durchlauf。死亡führtzu einemexponentiellhöherendurchsatz im vergleich mit der nequenzierung der ersten生成。NGS HAT VIELE VERSCHIEDENE ANWENDUNGEN，WIE SNP PROCHILING，GENEXPRESSANALYSE，DETEKTION VONGENETISCHENECHENENDERänderungenWie Mutationen Oder oder Chromosomalederänderungen。Sobald Die dna dna Extrahiert ist，musssiefürnie sequenzierung vorbereitet werden。
Die Unterschiedlichen schritte der probenvorbereitung werden hier aufgelistet：
- fragmentierung
- enden-Reparatur
- A尾
- 适当挖掘
- PCR放大
Darauf Folgt Die cluster-Stellung und die nequenzierung。
DNA突变
Es Gibt Unterschiedliche kllassifikatikationen von dna-munten;Du Kannst Basierend Auf der Schreibweise EinigesüberDie Mutationen Herausfinden。Zum Beispiel：
- 345G> t bedeutet，dass 345 Ein Guanin Durch Ein Thymin ersetzt Wurde。
- 345DELGT BEDEUTET，DASS AB位置345 Zwei Nukleotide Deletiert Worden Sind（Guanin and Thymin）。
- 345DUPA BEDEUTET，DASS的位置345 Eine Doplikation Stattgefunden Hat在Zwei Adeninen resustiert中。
- 345insta bedeutet，dass 345 Zwei NukleotideEingefügtWordenSind（Thymin und Adenin）。