Figura 1:Ejemplo de cromatograma.
El cromatograma (figura 1) es la representación de la señal adquirida por el detector con respecto al tiempo. Antes de que el analito alcance el detector, obtenemos una señal que es solo ruido y que se denomina línea base. Cuando el analito llega al detector, esta señal empieza a aumentar hasta un máximo y luego disminuye hasta que se haya detectado todo el analito. Este máximo se corresponde con la altura del pico. El tiempo desde la inyección hasta este pico máximo se denomina tiempo de retención (tR)
Pico
Además del tiempo de retención y la altura del pico, otra parte del pico es la anchura, que se mide como se muestra en la figura. A veces es interesante medir la mitad del pico (altura/2) y la anchura del pico en ese punto (w1/2). Estos números son útiles para calcular el llamado «número de placas» (N), un valor que aporta una idea de la eficiencia de una columna. Cuanto mayor sea el número, más eficiente es la columna. Es decir, columnas que dan lugar a picos más estrechos y nítidos.
此外,cuando aparecen dos的海岸边en el cromatograma, estos parámetros ayudan a calcular la resolución (R), que proporciona una idea de lo buena que es la separación de los dos analitos. Normalmente debe ser superior a 1,5 para una buena cuantificación.
Hay varios casos en los que no se consigue una separación de manera correcta y el resultado es una mezcla de picos en lugar de varios picos separados, que se corresponden con cada uno de los compuestos. Como hemos comentado anteriormente, la separación viene definida por la interacción del analito con la fase móvil y estacionaria. Cuando la fase móvil y la estacionaria tienen la misma polaridad, no se puede ejecutar la separación. Esto dará lugar a un cromatograma que muestra una mezcla de picos.
Concentración
Si cuentas a partir de la línea base, puedes observar que la curva contiene un área definida debajo de ella. El área del pico se utiliza para hacer la calibración. Esto se hace porque esa área es proporcional a la concentración del analito. Cuanto mayor sea la concentración, mayor será el pico y, por tanto, mayor será el área del pico.
Una vez que has fijado los puntos utilizando las áreas de los picos de las concentraciones conocidas, puedes hacer una regresión lineal (y = mx + y0) para averiguar la ecuación que relaciona el área del pico y la concentración del analito. El área del pico se representa en el eje y, mientras que la concentración del analito se representa en el eje x. y0es el punto de intersección entre la línea y el eje y, que es constante. Cuando aplicas un análisis de regresión lineal, podrás determinar la pendiente (m) de la recta. De este modo, puedes utilizar el área del pico calculada para tu muestra desconocida y calcular la concentración del analito, como se muestra en la figura 2.
Figura 2:Curva de calibración que muestra la relación entre el área del pico y la concentración.