En esta seccion se explican进行parametros小鬼ortantes de la cromatografía. Son útiles para interpretar el cromatograma, una representación de la intensidad de la señal procesada frente al tiempo.
Resolución (R)
Cuando aparecen dos picos en el cromatograma, es útil calcular la resolución de los dos picos (R), que da una idea sobre lo buena que es la separación de los dos analitos. Normalmente debe ser superior a 1,5 para llevar a cabo una buena cualificación.
La resolución R puede medirse comparando el tiempo de retención con la anchura del pico, como se muestra en la primera ecuación, o bien utilizando otros parámetros (número de placa teórico, selectividad y factor de capacidad) como se muestra en la segunda ecuación.
Donde R es la resolución, tRes el tiempo de retención, w es la anchura del pico, N es el número de placa teórico, α es la selectividad yk' es el factor de capacidad.
De la primera ecuación, B es el compònente con mayor tiempo de retención, y tRy W son el tiempo de retención y la anchura del pico de elución, respectivamente.
Factor de retención/Factor de capacidad (k')
El factor de retención (también conocido como factor de capacidad) es una medida de lo retenido que está un analito. Se calcula a partir del tiempo de retención (tR) y el tiempo de retardo (tM). El tiempo de retardo es el tiempo necesario para que la muestra llegue al detector después de la inyección. Por lo tanto, mide el tiempo que necesitan los compuestos no retenidos para llegar al detector. La expresión también puede escribirse en función del tiempo de retención relativo (t'R). Este es el tiempo que el analito necesita para llegar a la columna después de los compuestos no retenidos.
Si la constante de distribución es independiente de la concentración del componente de la muestra, entonces el factor de retención (k') es también igual a la relación de las cantidades de un componente de la muestra en las fases estacionaria y móvil, respectivamente, en el equilibrio:
Tiempo de retención (tR)
El tiempo de retención (tR) es el tiempo que cada analito necesita para ir del inyector al detector. Normalmente se calcula partiendo del momento de la inyección (t=0) hasta el máximo del pico, cuando la mayoría de las moléculas alcanzan el detector (t=tR), indicado por el punto más alto del pico.
Este tiempo de retención depende de la afinidad entre el analito y la fase móvil y estacionaria. Cuanto más interactúe el analito con la fase estacionaria, más largo será el tiempo de retención. Por el contrario, cuanto más interactúe el analito con la fase móvil, con mayor rapidez se eludirá y, por tanto, el tiempo de retención será corto.
Sensibilidad
La intensidad de la señal de cada analito es proporcional a la concentración. Cuanto menor sea la concentración, menor será la señal. Por lo tanto, es importante saber cuál es la menor concentración de del analito para obtener una señal que pueda distinguirse de la línea base. Si la concentración en una muestra desconocida es inferior a este límite, no podremos detectarlo aunque esté presente en la muestra.
Selectividad (α)
La selectividad es una medida de la diferencia relativa de retención. Se mide comparando las diferencias en los factores de retención (k'). El valor de selectividad debe ser mayor que 1 para que se produzca la separación.
Número teórico de placas (N)
La eficiencia de La一列圆柱机构检测科莫numero de plato teórico (N). Se trata de una medida del ensanchamiento relativo de los picos (o anchura de los picos) para un analito en la separación. El número de plato teórico se mide comparando el tiempo de retención (tR) y la anchura del pico (w). Existen dos fórmulas que se pueden utilizar para medir el número de plato teórico, dependiendo de si se conoce la anchura del pico (w) o la mitad de la anchura del pico (w1/2).
Un número de placa más alto da bandas más nítidas y estrechas que dan lugar, a su vez, a una mejor detección y una mejor capacidad de los picos para resolver muestras complejas. El número de placa teórico aumenta cuando se utiliza un tamaño de grano más pequeño. El uso de un tamaño menor de microesferas también tiene sus ventajas, como la mejora de la resolución, así como la disminución del tiempo de ejecución. Sin embargo, cuando se utiliza un tamaño de microesfera más pequeño, se alcanza una mayor presión.
Interpretación de los datos
Si inyectas una muestra con varios analitos, tendrás varios picos en el cromatograma. Si no es así, significa que la separación de las moléculas no fue lo suficientemente buena. En ese caso, hay que cambiar algunos parámetros (fase móvil, fase estacionaria, temperatura, flujo) para obtener la separación deseada.
Si la separación es buena (la resolución es superior a 1,5) se puede identificar qué pico corresponde a cada molécula. Para ello, hay que pensar de qué está hecha la fase estacionaria (¿polar o no polar?) y ver si tus analitos son más o menos polares.