La clonazione molecolare si riferisce all'assemblaggio di molecole di DNA in unvettoree la successiva trasformazione di联合国生物(spesso batteri o lieviti). I metodi di clonazione molecolare sono centrali per la biologia e la medicina. Il termine clonazione molecolare comprende molte tecniche diverse. Un tipico flusso di clonazione molecolare è il seguente:

  1. Isolamento del gene di interesse

  2. Clonazione del gene in un vettore

  3. Trasformazione dell'organismo ospite con il costrutto del vettore

  4. Selezione antibiotica delle cellule trasformate

  5. Isolamento di cloni con lo stesso background genetico

La conferma dell'assemblaggio del plasmide può essere determinata eseguendo il sequenziamento del DNA. È importante confermare che gli inserti sono stati legati con successo in un vettore plasmidico con la conformazione e il frame di lettura corretti. Una mutazione frame-shift può causare mutazioni nonsenso o missenso che portano all'espressione di proteine non funzionali.


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