Die Sequenzierung Ist Eine Technikzzum“Ablesen”Der GenauenReihenfolge der Nukleotide在einem DNA片段中。克莱恩脱氧核糖核酸Fragmente,Ganze Gene Oder SogarGenomeKönnenShatenenziertWerden。

Die Am Weitesten Verbreitete DNA-Sequenzierungstechnik Basiert Auf der Von Sanger Entwickelten Kettenterminierung。柴胡甲基ist der聚合酶 - Kettenreaktion(PCR)SehrÄhnlich,Verwendet aber Nur Einen Primer,DerNäheder Zu Untersuchenden地区Am 3er-Ende der Dna-Vorlage andockt(Abbildung 1)。Währendder semenzierungsreaktion wird eine milchung aus normalen nukleotiden(Datp,dttp,dctp und dgtp)und“stopp”-nukleotiden(ddatp,ddttp,ddctp und ddgtp)zur dna-vorlagehinzugefügt。Die Stop-Nukleotide Sind Jeweils Mit Einer Bestimmten Farbe Markiert。在Jedem Zyklus Wird Die Ziel-DNA Dorch Eine DNA-聚合酶副副本,BIS EIN STOPP-NUKLEOTIDHinzugefügtWIRD,DAS DIE WEITEREVERLÄNGERUNGSTOPT(KETTENTERMINIERUNG)。Nach 35 Zyklen IstEineGroßeAnzahlvon fragmenten在allenmöghichenlängennerstanden。柴油碎片在Ein Spezielles acrylamidgel Gegeben,WoIhreLängeund“Endbasen”Festgestellt Werden。da die fragmente aufgrund ihrergrößeim gel aufgetrennt werden,werden die markierten nukleotide nacheinander nachgewiesen,Sodass die genaue dna-sequenz im碎片rekonstruiert werden kann。

Der Zweck der Semenzierung Ist Beispielsweise De Dermanage dermondenzezeenz einesgens gens,der vergleich von Arten Auf sendenzebene(基因Oder Genom)臭虫Diee Motee Nach Einer突变。

Die Obere Linke Ecke des Bildes Zeigt Vier Verschiedenfarbige Kugeln Mit Vier Verschiedenen Buchstaben在Ihrem Cinnen,Die Als Fluoreszierend Markierte DDNTPS Bezeichnet Werden。Der Pfeil Nach Unten Zeigt Auf Eine Dna-Vorlage,Die Aus Blauen Kugeln在Einer Reihe Mit Vier Verschiedenen Buchstaben Besteht。Ein Weiterer Pfeil Zeigt Nach Unten Auf Reihen von DNA- Semenzen。Jede Reihe Hat Eine Base Weniger Als Die Obere,Wibei Die Letzte Base Auf der Linken Seite Mit Einer Farbe Versehen Ist,Die Den Farben der DDNTPSDarüberEntspricht。Von Diesen Reihen Aus Weist Ein Pfeil Nach Rechts Auf Das Graue,Horizo​​cyale Rechteck Mit Vier Vier Vier Vier Vier jeweils Eine Dna-Base und Farbigen Streifen inVerschiedenengröchen,Die den Farben der Ddntps entsprechen。Ein Weiterer Pfeil Aus den Reihen Zeigt Auf den unteren rechten teil eines bildes,Das Ein Diagragem Zeigt,在Dem Jeder Spitzenwert Eine Dna-Base Bezeichnet。

ABBILDUNG 1:SchematischerÜberblickÜberDie Sanger-Methode(Kettenterminierung)Zur Dna-Sequenzierung

Währendder elongationszyklen werden dna-fragmente allermöghichenlängenproduziert,Die Jeweils Mit Einem Farbigen Stopp-Nukleotid Terminiert Werden。Wenn Die Fragmente entsprechend IhrerGrößeAUFeinem gel getrennt werden,Zeigt Die Reihenfolge derbane die genaue dna-sequenz a。

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