结合的酶到一个抗体包括稳定的共价键的形成。酶的一些例子是:辣根过氧化物酶(HRP)，脲酶和碱性磷酸酶(AP)。抗体要么是单克隆或多克隆．

在ELISA中，酶结合抗体可以是一种一抗或二抗，这取决于ELISA的类型。在任何一种情况下，酶都会放大信号——在阱中结合的酶越多，产物出现的速度就越快;阱中结合的酶越少，产物形成越慢。对于显色产物，当达到所需的色强时，直接测定产物的吸光度。在某些情况下，a停止解决方案用于在分析中建立一个固定的终点。