La conjugación de unaenzimacon unanticuerpoimplica la formación de enlaces covalentes estables. Algunos ejemplos de enzimas son la peroxidasa de rábano picante (PHR), la ureasa y la fosfatasa alcalina (FA). Los anticuerpos pueden sermonoclonalesopoliclonales.

En el ELISA, el anticuerpo conjugado con una enzima puede ser primario o secundario, dependiendo del tipo de ELISA realizado. En cualquier caso, la enzima amplifica la señal: cuantos más conjugados enzimáticos se unan en el pocillo, más rápido aparecerán los productos; cuantos menos conjugados enzimáticos se unan en el pocillo, más despacio se formarán los productos.

En el caso de los productos cromogénicos, una vez que se alcanza la intensidad de color deseada, la aborbancia del producto se mide directamente. En algunos casos, se usa unasolución de parada帕拉fijar el puntofinal del ensayo.