凝胶电泳是一种用于分离不同尺寸的带电大分子的方法,并估计它们的长度。
凝胶电泳通常用于分离PCR扩增DNA碎片:
在琼脂糖凝胶的一端装载样品在小孔中。电流施加到凝胶上,用正极在孔的末端发下电极。带负电的DNA将通过凝胶朝向正电极移动。较小的DNA分子通过凝胶移动比较大的DNA分子更快,导致尺寸分离。在电泳后,可视化DNA并显示为从相同长度的DNA片段衍生的带状。通过这种方法只能可视化大量DNA(数百万份)。还在凝胶上加载含有已知尺寸的DNA片段混合物的“DNA梯子”。通过将距离与DNA梯子进行比较(图1),可以估计DNA样品的尺寸。
图1。来自PCR反应的不同长度的片段在凝胶上进行。片段将以速度和相对于其尺寸的距离移动:较小的DNA分子将更快地移动凝胶,并且比较长的DNA分子进一步移动。
通过将PCR产物与加载缓冲液混合,我们可以在凝胶电泳期间可视化PCR产物的行进程度。加载缓冲液也可用于使样品更重,因此它将沉入凝胶的底部。
有许多用于加载缓冲液的组合物,然而,它们通常含有以下化学品:
这将为样本添加颜色并帮助您在琼脂糖凝胶上可视化样本位置。
这将通过增加整体样品粘度来使样品更重。