Un inhibidor mixto interactúa con la enzima sola y con el complejo enzima-sustrato. La ecuación de dobles recíprocos para las inhibiciones mixtas es la siguiente:
1/V0= α’/Vmáx+ Km•α/Vmáx• 1/[S]
en la que α = 1+[I]/KIy α’ = 1+[I]/K’I
En el caso de la inhibición mixta, las gráficas de Lineweaver-Burk muestran pendientes distintas e intersecciones en y distintas cuando hay diferentes concentraciones de inhibidor. En este caso, para calcular los parámetros, hay que preparar dos gráficas nuevas. En primer lugar, hay que trazar las intersecciones con respecto a las concentraciones de inhibidor; esto hace que se pueda obtener la K’Iy la Vmáx, como se describe en la inhibición acompetitiva. En segundo lugar, hay que trazar las pendientes con respecto a las concentraciones de inhibidor; a partir de esto, se puede averiguar la KI. La pendiente de esta gráfica es Km/ Vmáx, de modo que, multiplicando esta pendiente por la Vmáxque hemos obtenido, sacaremos la Km.
Figura 1:a) Gráfica de Lineweaver-Burk que muestra inhibición mixta. b) Intersecciones en y de cada regresión lineal con respecto a la concentración de inhibidor.
Inhibicion没有competitiva
En el caso especial de la inhibición mixta en la que α = α', es decir, KI= K'I, tenemos lo que se llamainhibición no competitiva. Es este caso especial, el inhibidor interactúa de manera favorable con el complejo enzima-sustrato, al igual que lo hace con la enzima sola. Al representar los datos cinéticos en una gráfica Lineweaver-Burk, unaintersección común en xmuestra que el competidor es no competitivo [1, 2].
Así pues, la ecuación de dobles recíprocos para la inhibición no competitiva es la siguiente:
1/V0= α/Vmáx+ Km•α/Vmáx• 1/[S]
en la que α = 1+[I]/KI
Al representar en una gráfica los datos cinéticos usando un inhibidor no competitivo, la Kmaparente sigue siendo la misma que la Kmreal, y se puede calcular a partir de una gráfica de Lineweaver-Burk, dividiendo la pendiente entre la intersección en y [1]. Para calcular la Vmáxy la KI, las intersecciones en y de las diferentes líneas obtenidas a partir de la regresión lineal de las gráficas de Lineweaver-Burk con diferentes concentraciones de inhibidor tienen que representarse con respecto a la concentración de inhibidor. Al representarlas mediante regresión lineal, la Vmáxy la KIse pueden calcular a partir de esta gráfica del mismo modo que en el caso de la inhibición acompetitiva: la Vmáxse calcula llevando el recíproco a la intersección en y de esa línea, y la KIse calcula dividiendo la intersección en y entre la pendiente.
Pasos para calcular los parámetros cinéticos al usar un inhibidor no competitivo
- Prepara las gráficas de Lineweaver-Burk
- Calcula la Kmdividiendo la pendiente de cualquiera de esas líneas entre la intersección en y correspondiente (la Kmobtenida no debería depender de la línea que se usa).
- 特拉扎拉intersecciones en y de每una de这些representaciones como una función de la concentración del inhibidor.
- Para calcular la Vmáx, coge el recíproco de la intersección en y de esta gráfica.
- 帕拉calcular la KI, divide la intersección en y de esta gráfica entre la pendiente.
Referencias
Lehninger, Albert L.; Nelson, David L.; Cox, Michael M. (2008).Principles of Biochemistry(5th ed.). New York, NY: W.H. Freeman and Company. ISBN 978-0-7167-7108-1.
Atkins, Peter W.; de Paula, Julio; Friedman, Ronald (2009).Quanta, Matter, and Change: A molecular approach to physical chemistry. Oxford University Press. ISBN 978-0-19-920606-3.