细致的底漆设计是避免非特异性PCR产品的关键问题。有几种类型的软件可以帮助您进行底漆设计（例如Primer3），可以帮助您考虑引物的主要特征：

• 基因组中的位置：底漆必须与将要复制的区域的开始互补。特殊特征将根据实验的目的适用。例如，如果我们想扩增一个特定基因，对于避免潜在地退火到其他靶标的底漆很重要。
• 熔化温度（TM）：引物应在60ºC下向DNA模板退火。通常，TM为65ºC就足够了。鸟嘌呤 - 环氨酸（GC）含量非常重要地定义该温度。
• 结构：应避免引物之间的二级结构和互补配对，以避免底漆二聚体。

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PCR的底漆设计

QPCR的底漆设计