Nella HPLC in fase inversa, lafase stazionariaè non polare e lafase mobilee polare。

La HPLC in fase inversa è il metodo HPLC più comune. Quando si utilizza la fase inversa, i composti non polari (C) interagiscono maggiormente con la fase stazionaria, vengono trattenuti maggiormente nella colonna ed eluiscono per ultimi, mentre i composti polari (A) interagiscono maggiormente con la fase mobile ed eluiscono per primi.