在反相高效液相色谱法中固定相是非极性的流动相是极性的。

反相高效液相色谱法是最常用的高效液相色谱法。使用反相时，非极性化合物(C)与固定相的相互作用最大，在柱中停留时间最长，洗脱液中停留时间最长，而极性化合物(A)与流动相和洗脱液的相互作用最大。