培养板应使用玻连蛋白包被,以确保PSC粘附和正常生长。要包被培养板,我们首先需要使用PBS稀释玻连蛋白,根据培养表面积及所需的体积和特定的包被浓度制备工作浓度的玻连蛋白。该包被浓度取决于细胞系,范围为0.1-1.0 µg/cm2,标准值为0.5 µg/cm2。因此:

工作浓度 = 包被浓度 x (培养表面积/培养表面积所需的体积)

您可使用下表作为参考:

培养容器 近似表面积 (cm2) 稀释的基质体积 (mL)
6孔板 10 cm2/孔 1 mL/孔
12孔板 4 cm2/孔 0.4 mL/孔
24孔板 2厘米2/孔 0.2 mL/孔

使用12孔板:

工作浓度 = 0.5 µg/cm2x(4厘米2/0.4 mL) = 5 µg/mL

考虑到玻连蛋白储液的浓度为0.5 mg/mL,其稀释倍数计算方法如下:

稀释倍数 = 储液浓度 (0.5 mg/mL)/工作浓度

稀释倍数 = 0.5 mg/mL/5 µg/mL = 100X

因此,要包被整块12孔板,我们需要将48 µL加入4.752 mL PBS中,每孔加入0.4 mL混合物。我们也建议分装储液,以免反复冻融。

包被好培养板后,室温孵育1小时即可使用。或者可以将培养板置于2-8 °C保存至多1周。为防止溶液蒸发,应正确密封培养板,且必须在使用前先室温预热至少1小时。

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