分子克隆虚拟实验室

分子克隆是为现代生物技术奠定了基础的技术之一。该技术首先在2080年使用中使用，并允许插入衍生自人体的胰岛素基因插入酵母和大肠杆菌细菌中。这允许微生物生产胰岛素，这是糖尿病治疗中的主要用药。从那时起，分子克隆和基因工程已成为药物生产，生物乙醇生产以及医疗到基础研究的最基本的技术之一。在分子克隆实验室中，您将学习如何组装包含RAD52和GFP的表达载体。目的是通过观察GFP信号来控制用十氧化线的Rad52的表达水平并监测表达水平。

矢量汇编

在分子克隆实验室的第一部分中，您将学习如何从酵母细胞中提取DNA，并限制来自另一种载体的DNA中的酶分离。首先，您将准备提取的DNA并测量浓度，然后，使用正确的连接酶，缓冲液和温度温度，组装含有感兴趣基因（Rad52）和GFP的载体。

转型

使用电穿孔将组装的载体转化为酵母细胞。RAD52基因表达由基因调节剂调节。当向培养基中加入十Xycyline时，Rad52基因将被沉默。GFP用作RAD52的报告基因，具有活性RAD52的细胞还将表达GFP和具有沉默RAD52的细胞不会表达GFP。通过将细胞暴露于蓝光来监测GFP信号。

DNA损伤和修复系统

RAD52被假设为DNA修复的重要球员。您将通过在表达Rad52和沉默的Rad52的细胞中通过UV辐射进行比较诱导DNA损伤的结果的实验​​。如果RAD52在执行DNA修复方面很重要，则具有沉默的RAD52的细胞不会在UV辐射处理中存活。总而言之，分子克隆实验室将为您提供分子克隆技术和报告基因的概述，您将学习所有关于DNA损伤和DNA修复系统。