der dre-drei-antibiotika-zusammenbau（3a-zusammenbau）ist eine methode zum zumenbau von zweiBiobricks手套克制inzym-klonierung。Drei VerschiedeneAntibiotikaresistenzenErmöglicheneine Effiziente selektionfürdenkorrekten zusammenbau durch antibiotika。Beim 3a-Zusammenbau Werden Die Die Crestiktionsstellen ampräfixund suffix verwendet，um die beiden teilezusammenzufügen。

Eine Wirksame Antibiotikaselektion Macht死亡Gelreinigungund die kolonie-pcrder rustierendenkolonienüberflüssig。理论Sollten Etwa 97％der Kolonien dengewünschtenaufbau aufweisen。

methode

fürEinenerfolgreichen Zusammenbaubenötigtman zwei teile und eingrundgerüstMitverschiedenen antibiotikaresistenzgenen（在Abbildung 1 Durch Gelbe gelbe pfeile semblisisiert）。

Abbildung 1：3A-zusammenbau（urheberschaft igem.org）

• Crestiktionsverdau

  • Die Linke Teilprobe Wird Mit Ecori（E）和Spei（S）Ausgeschnitten。

  • Die Rechte Teilprobe Wird Mit Xbai（X）UND PSTI（P）Ausgeschnitten。

  • DAS质粒形状 - 质量mit ecori（e）und psti（p）ausgeschnitten。在Abbildung的Dem Beispiel中，1 Wird EIN线性质量质质质verwendet。Alternativ Kann Auch Ein质粒Verwendet Werden，Das Einccdb-genEnthält。

• Alle 3 Drestiktionsverdaue Werden Erhitzt，UM Alle限制性酶Abzutöten。

• 结扎：EineäquimolareMenge Aller 3 Bristiktionsverdau-Produkte wird einer ligationsReaktion kbombiniert。DasGewünschteErgebnisist，Dass der Spei-überhangder Linken Teilprobe Mit Dem Xbai-Xbai-Xbai-überhangrechten Teilprobe Ligiert Wird，Wodurch Eine Narbe Entsteht，Die Mit Mit Keinemerer Enzyme enzyme geschniten werden werden werden werden werden werden werden werden werden。Die neue zusammengesetzte teilprobe wird wird a den ecori-und psti-stellen在das konstruktionsplastid-grundgerüstligiert中。

• Zellen Transformiert和Auf Platten Mit Antibiotikum CGezüchtetWird，überlebenNur Kolonien Mit Der Korrekten Kontuktion中的Wenn Die结扎。