El ensamblaje de Tresantizióticos（ensamblaje 3a）esunmétodoconel que se ensamblan dosBiobricks.Por Medio de UnaClonaciónPorEnzimas deRestricción。Tener Tres.Los antiziSticosDistintas Permite Seleccioncionar de Manera efitiede Los ensamblajes Crextos Por Medio de AntiCoS。el ensamblaje 3a美国los sitios deRestriccióndelprefijo y el sufijo para ensamblar las dos pittes。

Si losantizióticosseseleccionan de manera efectiva，Seiellina la necesidad dePurificar Con Gel.y arealizar la.PCR.Las Coloniasweryantess。enTeoría，阿佩西米迪纳森埃尔97％de las ColoniasdeberíanredetereCon El Ensamblaje Deseado。

Método.

Que El Ensamblaje SeSei得eqeiceConéxito，Necesitas DOS部分Y Una Cadena Con Diferentes基因抵抗Losantizióticos（SeñaladosConFlechas Amarillas En La Figura 1）。

Figura 1：ensamblaje 3a（créditos：igem.org）

• DigestiónConeNzimasdeRestricción

  • La Paree Izquierda de la Muestra Se Recorta Con Ecori（e）y Spei（e）。

  • La Parte derecha de la Muestra Se Recorta Con Xbai（x）Y Psti（P）。

  • La Cadena delPlásmidoSE Recorta Con Ecori（e）y Psti（P）。En El Ejemero de la Figura 1，SE USA Una Cadena dePlásmidoLinealizada。tambiénsepodríausar联合国PlásmidoGen CCDB.。

• las tres digestiones con enzimas derestricciónshecalientanparaialímatar a todas lasEnzimas deRestricción.。

• Ligación.：SE Combina Una Cantidad Equimolar de Los Tres Productos de ladigestiónnenunareacióndeligación。El结果Deseado Es La Paree Izquierda del Voladizo de la Spei de la Muestra Ligado Con La Parte Derecha del Voladizo de Xbai de La Muestra，Lo Cicatriz Que Ninguna de Nuestras Enzimas Puede Secionar。La Nueva Muestra Compuesta Se Liga en La Cadena delPlásmidodeConstucciónPorLos Sitios Ecori Y Psti。

• Cuando LaLigaciónSe变换encélulasy crece en las placas conantrióticoc，solo las colonias con laConstucciónfristasobroviven。