Figure 1 :Cette image illustre les billes qui sont densément emballées dans une colonne, comme le montre la première entrée circulaire. Lorsque nous zoomons sur les billes individuelles, comme indiqué par la deuxième entrée circulaire, nous pouvons voir le matériau qui recouvre la surface des billes.
La colonne est un élément fondamental de l'appareil de CLHP car c'est là que se fait la séparation des analytes. La colonne est remplie avec de petites billes de silice qui peuvent être recouvertes. C'est le matériau de surface recouvrant les billes qui détermine la polarité. Les billes de silice sont polaires par nature, mais lorsqu'elles sont recouvertes de longues chaînes de carbone, elles deviennent non polaires. Comme les billes à l'intérieur de la colonne sont stationnaires pendant l'analyse, on les appelle aussi laphase stationnaire.
En phase inverse, la phase stationnaire contenue dans la colonne est non polaire. Par conséquent, les analytes non polaires vont interagir avec la colonne et y rester plus longtemps. Elles quitteront la colonne plus tard que les composés polaires.
Les types d'interactions
Figure 2 :Il existe 4 types d'interactions, à savoir les interactions non polaires, les interactions polaires, les interactions ioniques et les interactions basées sur la taille des molécules.
雷斯法案在列是generalement faites de silice ou d'un autre polymère. Différentes chaînes peuvent être attachées à la structure, donnant ainsi différents types d'interactions :
Les interactions basées sur la polarité :Les composés polaires seront retenus par les phases stationnaires avec des chaînes polaires, comme -CN ou -OH. Les composés non polaires seront retenus par les groupes non polaires de la phase stationnaire, tels que -C8 ou -C18.
Les interactions ioniques :Selon le pH, certains groupes peuvent être protonés ou déprotonés, formant ainsi des espèces ioniques. Si l'analyte et la phase stationnaire ont des charges opposées, les analytes seront retenus dans la colonne.
La taille moléculaire :Les petites molécules peuvent être retenues dans les pores de la phase stationnaire alors que les grosses molécules ne seront pas piégées. Par conséquent, les petites molécules resteront plus longtemps dans la colonne, tandis que les grosses molécules passeront plus rapidement.
Les techniques de séparation
En fonction du type d'interactions présentes entre les analytes et la phase stationnaire, nous pouvons distinguer deux techniques principales de CLHP :
- La CLHP en phase inverse :Cette technique est basée sur des interactions non polaires. Les composés non polaires se déplacent plus lentement dans la colonne que les composés polaires.
- La CLHP en phase normale :Cette technique est basée sur les interactions polaires. Les composés polaires se déplacent plus lentement que les composés non polaires dans la colonne.
Deux autres techniques sont la chromatographie à échange d'ions (basée sur les interactions ioniques entre les analytes et les résines chargées positivement ou négativement) et la chromatographie d'exclusion de taille (basée sur la taille moléculaire des analytes).
L'échelle de polarité
La polarité d'une molécule peut être comparée à celle d'une autre molécule. Une molécule peut être plus polaire par rapport à une autre molécule, mais elle peut aussi être moins polaire par rapport à une autre molécule. On peut dire que la polarité possède sa propre échelle de mesure. Par exemple, le CN est plus polaire que le C8 mais moins polaire que la silice.
Figure 3 :Échelle de polarité pour la phase stationnaire.