Die DNA-ISOLIERUNG AUS ZELLEN KANN MIT DER苯酚 - 氯仿 - 甲状越实DurchgeführtWerden。DIESE METHODE ERGIBT EINE GENomische DNA,Die Millionen Von GenenEnthält。Um Ein Bestimmtes Gen Von Interesse Aus der Genomischen DNA Zu Islieren,Kann Einepcr麻省理工学院Spezifischen PrimernDurchgeführtWerden。einem vektor vorliegt中的wenn das betreffende gen,kann ein spezifischesJrestiktionsenzymFürDie Islierung Verwendet Werden。

nukleinsäurenauszellenKönnenmit der苯酚 - 氯仿 - 甲状越实的伊利特·沃登苯酚 - 氯仿,Eine Mischung Auspuffergesättigtem苯酚和氯仿ImVerhältnis1:1。der erste schritt der extraktion iSt die zelllyse und Hologenisierung在WässrigerLösung中。Dann Wird Das苯酚 - 氯仿 - Zugeben,Wodurch Zwei Phasen Entstehen,Die Durch durch Zentrifugation weiter getrennt Werden。gereinigtes苯酚帽Eine Dichte von 1,07 g/cm3,Während氯仿EineHöhereInhereDichte Hat(1,47 g/cm3)。Daher Entstehen bei der Zentrifugation Zwei Phasen:Die Untere Organische阶段和Die DieObereWässrige阶段。
nukleinsäurenerhalten ihrepolaritätdurchdas negativ geladenephosphatgerüst;Der OberenWässrigen阶段Löslich的Daher SindNukleinsäuren。蛋白焓疏水性,在Wechselwirkung treten und dazuführen中模仿苯酚,DASS DIE蛋白和dergrenzflächeZwischenZwischen Zwei Zwei Zwee phasen phasen ausfallen(eftt alsweißeßeAusflockung)。Lipide Haben Ebenfalls Einen Hyprophoben bereich undlösenSich in der Unteren Organischen期AUF。der ph-wert des gemischs bestimmt die trennung dernukleinsäuren。Bei Neutrem pH螺旋孔RNA和DeroberenWässrigen相,Bei Saurem ph-wert wert wandert dna dna in to untere Organische相和DeroberenWässrigen相的Die die rna bleibt。Im Letzten Schritt Werden DieNukleinsäurenDurchAusfällungMit异丙醇ausderWässrigen阶段Gewonnen。
der dna-ertrag(oder die dna-konzentration)und diereneheitKönnendurch sesung sesung der吸收mit einem einem spektralphotometer bestimmt werden。纳米旋风iST EIN SPEKTRALPHOTOME,DAS DIE吸收VON0,5-2μLMessen Kann,Indem es EinProbenrückhaltesystemstemstemstemVerwendet。Dasprobenrückhaltesystemstememöglicht模具Messung von Proben Mit Hoher Konzentration OhneVerdünnung。Die吸收Wird Bei 260 nm(A260)Gemessen,Wo Die DNA DAS Licht AmStärkstenAmporbiert。Die Menge des Apporbierten Lichts IST在Der探针中比例比例的DNA-MENGE。
Die beziehung wird durch das beer-lambert-gesetz beschrieben:c =(a *ε)/b
C:ng/μl中的nukleinsäurekonzentration。
答:AU中的死亡吸收
ε:ng-cm/μl中
B:chichtdicke in cm
der expinktionskoeffizient vondoppelträngigerDnaBeträgt50ng-cm/μl
在Diesem Fall中,BeträgtDie Schichtdicke des Nanodrop 10毫米。
Die Reinheit der dna kann bewertet werden,Indem siebeiλ= 280 nm,λ= 230 nm und undλ= 320 nm gemessen und dasverhältnisfür260/280 nm,260/230 nm und 260/320 nm und 260/320 nm berechnet wird。Nukleinsäuren吸收性Licht Bei 260 nm Stark,WährendOrganische Verunreinigungen wie phie phie trizol Licht Bei 230 nm und proteine Licht Bei 280 nm吸收。WederNukleinsäurenNOCH蛋白吸收性Licht Bei 320 nm。
für260/280镀金Einverhältnisvon etwa 1,8 als reine dna,währendfürreine rna ein ein einverhältnisvon von etwa 2镀金。für260/320 bedeutet einverhältnisvon 1,8-2,2 im allgemeinen,dass dienukleinsäureprobeals rein gilt。BEI 260/230 Bedeutet EinVerhältnisvon <1,8,erheblichem umfang umfang vorhanden sind的dass andische verunreinigungen。